长链非编码NRON通过自噬通路调控肉鸡脂肪生成的研究

发布时间：2023-08-18 17:01

　　长链非编码RNA NRON(ncRNA repressor of the nuclear factor of activated T cells)是活化T细胞核因子NFAT(nuclear factor of activated T cells)的非编码RNA抑制物。近年来的研究发现NRON及NFAT,除了与心肌、骨骼肌发育相关,而且同脂肪细胞分化也有关系。此外,NFAT蛋白活性激活有赖于钙/钙调蛋白依赖的磷酸酶和钙调磷酸酶(calcineurin,Cn)通路,并且钙调磷酸酶参与调节NFAT的脱磷酸化,影响NRON与NFAT通过RNA-蛋白复合物的形式来发挥作用;同时,此钙调信号通路可以调节溶酶体形成,影响自噬体行使降解功能。由此可见,长链非编码RNA NRON可能通过自噬通路来调控肉鸡脂肪生成。本研究以东北农业大学肉鸡腹脂双向选择系为材料,使用肉鸡各部分组织及前脂肪细胞,并通过基础的分子生物学实验(Real-time RT-PCR、Western Blot、细胞培养、PCRRFLP技术等),初步探讨NRON与肉鸡脂肪生成间的关系。主要研究结果如下:(1)基于高、低脂系鸡基因组重测序结...

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摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 研究背景与科学意义
        1.1.1 现代肉鸡育种及生产的需要
        1.1.2 探索脂肪生成的相关调控机制
    1.2 文献综述
        1.2.1 长链非编码RNA研究进展
        1.2.2 脂肪性状相关的lncRNA研究进展
        1.2.3 NRON及NFAT基因研究进展
        1.2.4 lncRNA与自噬通路
    1.3 本研究的目标、内容和研究方案
        1.3.1 研究目标
        1.3.2 研究内容
        1.3.3 研究方案
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 组织样采取
        2.1.3 主要药品与试剂
        2.1.4 主要仪器设备
        2.1.5 缓冲液与常用试剂的配制
        2.1.6 主要分子生物学软件
    2.2 实验方法
        2.2.1 总RNA的提取
        2.2.2 总RNA的反转录
        2.2.3 引物设计与合成
        2.2.4 Real-time RT-PCR
        2.2.5 PCR扩增
        2.2.6 酶切反应
        2.2.7 基因效应分析
        2.2.8 鸡前脂肪细胞的分离培养及诱导分化
        2.2.9 鸡前脂肪细胞系(ICP-1)的培养
        2.2.10 油红O染色、提取比色及蛋白校正
        2.2.11 蛋白免疫印迹
        2.2.12 统计分析
3 结果与分析
    3.1 鸡NRON基因多态性检测
        3.1.1 SNP位点发现
        3.1.2 多态性检测分析
        3.1.3 连锁不平衡分析
    3.2 鸡NRON和NFAT基因表达规律
        3.2.1 NRON基因在肉鸡不同组织中的表达规律
        3.2.2 NFAT基因在肉鸡腹部脂肪组织中的表达规律
        3.2.3 NRON及NFAT基因在诱导分化的前脂肪细胞中表达规律
    3.3 在诱导分化前脂肪细胞中抑制钙调磷酸酶
    3.4 自噬相关基因在细胞和组织中的表达规律
        3.4.1 ATG5和BECN1 mRNA在腹部脂肪组织中的表达规律
        3.4.2 ATG5和BECN1蛋白在腹部脂肪组织中的表达规律
        3.4.3 ATG5和BECN1 mRNA在诱导分化前脂肪细胞中的表达规律
4 讨论
    4.1 NRON基因与肌肉生长发育
    4.2 NRON及NFAT基因的转录调控
    4.3 自噬与脂肪生成
        4.3.1 脂肪组织和前脂肪细胞中的自噬发生
        4.3.2 钙调磷酸酶介导的自噬发生
5 结论
6 展望
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文



本文编号：3842590