家鸡肝脏中microRNA的克隆及其靶基因预测

发布时间：2023-09-03 16:58

　　microRNAs(miRNAs)是近年来发现的一种非编码的小RNA，长度仅18-24个核苷酸左右，普遍介导基因转录后的调节，参与调控机体各种生理进程。miRNA与疾病如肿瘤的发生发展密切相关。研究发现血液循环中也存在miRNA，循环miRNA可以作为肿瘤无创诊断的生物学标志物。目前对未知miRNA序列的发现主要以生物信息学预测为主，而直接克隆法较少见。 运用RNA反转录5’末端的转换模板技术（Switching Mechanism At5’endof the RNA Transcript, SMART），对鸡肝脏中的microRNA进行了筛选分离，获取了新的microRNA序列。实验中，首先给microRNA加上poly(A)尾巴，结合SMART技术反转录得到microRNA的cDNA文库，再将长度适宜的片段连接到质粒，最后转化大肠杆菌克隆测序，获得了3条未知序列。经查证，这3条序列在miRBase中没有任何记录，其前体的二级结构预测都能形成茎环结构，符合microRNA前体的结构特征，为新发现的microRNA。 接着，针对获得的3条microRNA新序列，运用了3个常用的靶基因预...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 miRNA 简介
        1.1.1 miRNA 概述
        1.1.2 miRNA 的生物发生
        1.1.3 miRNA 的作用机制
        1.1.4 miRNA 的基因结构特征
    1.2 miRNA 研究进展
        1.2.1 miRNA 的表达及其调控
        1.2.2 miRNA 与胚胎干细胞的增殖分化
        1.2.3 循环 miRNA 与肿瘤
        1.2.4 miRNA 与其它疾病及诊断
        1.2.5 miRNA 与生物进化
    1.3 miRNA 研究方法
        1.3.1 生物信息学方法预测 miRNA 序列
        1.3.2 分子生物学方法
        1.3.3 miRNA 靶基因的预测及鉴定
    1.4 课题的目的与意义
第二章 家鸡肝脏miRNA的克隆
    2.1 材料与仪器
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 主要的酶和试剂
        2.1.3 缓冲溶液和试剂的配制
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 引物合成
    2.2 实验前的准备工作
    2.3 实验方法
        2.3.1 RNA 的提取
        2.3.2 琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 提取的完整性
        2.3.3 cDNA 的制备
        2.3.4 PCR 扩增检测模板的制备效率
        2.3.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测
        2.3.6 miRNA 的克隆测序
    2.4 测序结果分析
    2.5 实验结果
        2.5.1 目的条带的分离
        2.5.2 目的条带的连接转化
        2.5.3 交错 PCR 鉴定阳性克隆
        2.5.4 序列分析
    2.6 讨论
第三章 miRNA 序列的靶基因预测
    3.1 实验方法
        3.1.1 miRNA 的靶基因预测
        3.1.2 靶基因的功能分析
    3.2 实验结果
        3.2.1 miRNA 的靶基因预测结果
        3.2.2 靶基因的功能分析结果
    3.3 讨论
结语与展望
参考文献
硕士期间发表论文
致谢



本文编号：3845420