SREBP1在奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成中的功能研究
发布时间：2023-09-03 16:32
固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins, SREBPs)属于核转录因子家族,激活胆固醇和脂类合成与转运的相关基因,对维持体内的脂类平衡至关重要。迄今为止,对于奶牛乳腺上皮细胞中SREBPs或其他核转录因子如PPARy (Peroxisome proliferator-activated receptor gamma)哪个才是最重要的调节子仍有争论。mTOR (the mammalian target of rapamycin)是蛋白合成和细胞增殖的关键调节子,最近研究表明mTORC1能够调节SREBP1促进脂类合成。然而,SREBP1对mTOR在乳脂合成中的影响至今没有相关报道。本实验旨在确定奶牛乳腺上皮细胞SREBP1在乳脂合成中的作用及SREBP1对mTOR表达影响。通过研究SREBP1基因过表达和基因沉寂对乳脂合成影响实验,鉴定SREBP1在乳脂合成中的功能。实验通过添加硬脂酸和血清检测对SREBP1表达影响及对乳脂合成影响,确定硬脂酸和血清是否通过调节SREBP1从而调节乳脂合成,进一步阐明SREBP1对乳脂合...
【文章页数】：74 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
1.1 乳腺泌乳及乳脂合成机理
1.1.1 乳腺泌乳过程及调节机制
1.1.2 乳的生物化学组成
1.1.3 乳脂合成机理及调控
1.2 乳脂合成相关信号通路
1.2.1 SREBPs研究进展
1.2.2 PPARs研究进展
1.2.3 JAK-Stat5信号通路
1.2.4 mTOR途径
1.3 乳脂合成关键基因的研究进展
1.4 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 实验试剂和仪器
2.1.1 实验试剂
2.1.2 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养与鉴定
2.2.2 SREBP1基因沉寂分析
2.2.3 SREBP1过表达分析
2.2.4 硬脂酸及血清对乳脂合成影响
2.3 数据分析
3 结果与分析
3.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养及鉴定
3.2 奶牛乳腺上皮细胞SREBP1基因沉寂分析
3.2.1 最佳抑制效果siRNA的筛选
3.2.2 SREBP1基因沉寂效率
3.2.3 SREBP1基因沉寂对乳脂合成相关基因的影响
3.2.4 SREBP1基因沉寂对乳腺上皮细胞蛋白表达的影响
3.2.5 IF检测SREBP1与p-mTOR的表达与定位
3.2.6 乳腺上皮细胞脂滴含量测定
3.2.7 乳腺上皮细胞甘油三酯含量测定
3.3 奶牛乳腺上皮细胞SREBP1过表达分析
3.3.1 SREBP1基因PCR扩增结果
3.3.2 重组质粒pMD18-T-SREBP1的构建及PCR验证
3.3.3 重组质粒pGCMV/IRES/EGFP/SREBP1的构建及PCR验证
3.3.4 质粒pGCMV/IRES/EGFP/SREBP1转染至奶牛乳腺上皮细胞
3.3.5 SREBP1过表达对乳脂合成相关基因的影响
3.3.6 SREBP1过表达对乳腺上皮细胞蛋白表达的影响
3.3.7 IF法检测SREBP1与p-mTOR表达与定位
3.3.8 乳腺上皮细胞脂滴含量测定
3.3.9 乳腺上皮细胞甘油三酯含量测定
3.4 硬脂酸及血清对奶牛乳腺上皮细胞SREBP1与mTOR合成影响
3.4.1 硬脂酸及血清对乳脂合成相关基因的影响
3.4.2 硬脂酸及血清对乳腺上皮细胞蛋白表达的影响
3.4.3 IF法检测SREBP1与p-mTOR表达与定位
3.4.4 乳腺上皮细胞脂滴含量测定
3.4.5 乳腺上皮细胞甘油三酯含量测定
4 讨论
4.1 奶牛乳腺上皮细胞模型的建立
4.2 SREBP1的不同修饰及加工形式与功能的关系
4.3 SREBP1基因沉寂对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成影响
4.4 SREBP1基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成影响
4.5 奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成模型的建立
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读博士学位期间发表的学术论文
本文编号：3845385
【文章页数】：74 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
1.1 乳腺泌乳及乳脂合成机理
1.1.1 乳腺泌乳过程及调节机制
1.1.2 乳的生物化学组成
1.1.3 乳脂合成机理及调控
1.2 乳脂合成相关信号通路
1.2.1 SREBPs研究进展
1.2.2 PPARs研究进展
1.2.3 JAK-Stat5信号通路
1.2.4 mTOR途径
1.3 乳脂合成关键基因的研究进展
1.4 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 实验试剂和仪器
2.1.1 实验试剂
2.1.2 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养与鉴定
2.2.2 SREBP1基因沉寂分析
2.2.3 SREBP1过表达分析
2.2.4 硬脂酸及血清对乳脂合成影响
2.3 数据分析
3 结果与分析
3.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养及鉴定
3.2 奶牛乳腺上皮细胞SREBP1基因沉寂分析
3.2.1 最佳抑制效果siRNA的筛选
3.2.2 SREBP1基因沉寂效率
3.2.3 SREBP1基因沉寂对乳脂合成相关基因的影响
3.2.4 SREBP1基因沉寂对乳腺上皮细胞蛋白表达的影响
3.2.5 IF检测SREBP1与p-mTOR的表达与定位
3.2.6 乳腺上皮细胞脂滴含量测定
3.2.7 乳腺上皮细胞甘油三酯含量测定
3.3 奶牛乳腺上皮细胞SREBP1过表达分析
3.3.1 SREBP1基因PCR扩增结果
3.3.2 重组质粒pMD18-T-SREBP1的构建及PCR验证
3.3.3 重组质粒pGCMV/IRES/EGFP/SREBP1的构建及PCR验证
3.3.4 质粒pGCMV/IRES/EGFP/SREBP1转染至奶牛乳腺上皮细胞
3.3.5 SREBP1过表达对乳脂合成相关基因的影响
3.3.6 SREBP1过表达对乳腺上皮细胞蛋白表达的影响
3.3.7 IF法检测SREBP1与p-mTOR表达与定位
3.3.8 乳腺上皮细胞脂滴含量测定
3.3.9 乳腺上皮细胞甘油三酯含量测定
3.4 硬脂酸及血清对奶牛乳腺上皮细胞SREBP1与mTOR合成影响
3.4.1 硬脂酸及血清对乳脂合成相关基因的影响
3.4.2 硬脂酸及血清对乳腺上皮细胞蛋白表达的影响
3.4.3 IF法检测SREBP1与p-mTOR表达与定位
3.4.4 乳腺上皮细胞脂滴含量测定
3.4.5 乳腺上皮细胞甘油三酯含量测定
4 讨论
4.1 奶牛乳腺上皮细胞模型的建立
4.2 SREBP1的不同修饰及加工形式与功能的关系
4.3 SREBP1基因沉寂对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成影响
4.4 SREBP1基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成影响
4.5 奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成模型的建立
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读博士学位期间发表的学术论文
本文编号：3845385
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3845385.html
最近更新
教材专著
