犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA和胶体金试纸条检测方法建立
本文关键词：犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA和胶体金试纸条检测方法建立，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：犬细粒棘球绦虫病是由细粒棘球绦虫寄生于犬小肠内引起的一种人畜共患寄生虫病。该病呈全球流行,严重威胁人畜的健康,并对畜牧业的发展造成阻碍。犬是该病重要的终末宿主,也是该病流行的重要环节。细粒棘球绦虫的检测方法主要分为三大类,传统检测方法、免疫学检测方法、分子生物学检测方法。传统检测方法中的槟榔碱导泻法是该病检测的“金标准”。但是由于只有70%的犬对槟榔碱敏感,故该方法在临床应用中存在很大的局限性。因此,寻找一种有效、快速、便捷、不受外界条件影响的检测方法是防治犬细粒棘球绦虫病的关键所在。抗原捕获ELISA由于其特异性强、敏感性高、不受个体动物免疫应答水平的影响、取样方便,对样品的质量要求不高等特点非常适合细粒棘球绦虫的检测。本研究在实验室先前建立的三种犬细粒棘球绦虫双抗夹心ELISA检测方法的基础上,建立了具有检测快速、操作便捷、不需要特殊仪器等特点的Dot-ELISA和胶体金试纸条检测方法,为犬细粒棘球绦虫的防治提供了行之有效的方法和理论依据。本研究首先对本实验室制备保存的抗细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体2D12及抗细粒棘球绦虫Ediag A864多克隆抗体进行纯化。通过HRP标记的抗Ediag A864多克隆抗体建立了Dot-ELISA方法,胶体金标记抗Ediag A864单克隆抗体建立了胶体金试纸条检测方法,以期为犬细粒棘球绦虫诊断提供新的技术方法。犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA检测方法的建立本试验利用抗细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体2D12和HRP标记的抗细粒棘球绦虫Ediag A864多克隆抗体建立了犬细粒棘球绦虫Dot-ELISA检测方法,确定了最佳单抗包被量为0.5μg/片、最佳待检粪样稀释度为1:2、最佳酶标抗体稀释度为1:400、最佳封闭液为5%脱脂奶粉、最佳显色时间为10min。所建立的Dot-ELISA检测方法对7份新疆地区犬细粒棘球绦虫感染参照样品进行检测,符合率为100%,敏感性为1:8,与犬蛔虫阳性粪样、犬贾第虫阳性粪样均无交叉反应,使用不同批次的膜片均能得到相同的结果。应用所建立的Dot-ELISA检测方法对69份犬粪便样品(其中包括9份新疆地区犬细粒棘球绦虫感染参照样品,60份长春地区临床样品)进行检测,9份参照样品的检出率为100%(9/9),60份临床样品结果均为阴性。犬细粒棘球绦虫感染胶体金试纸条的研制以金颗粒标记的抗细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体2D12和抗细粒棘球绦虫Ediag A864多克隆抗体建立了犬粪便细粒棘球绦虫检测胶体金试纸条检测方法,确定了金标抗体最佳稀释度为10:1、硝酸纤维素膜为Millipore 135s、T线多抗最佳包被浓度为1mg/m L、C线抗体最佳包被浓度为0.5mg/m L。所研制的犬细粒棘球绦虫感染检测胶体金试纸条对10份新疆地区犬细粒棘球绦虫感染参照样品进行检测,符合率为100%,敏感性为1:4,与犬蛔虫阳性粪样、犬贾第虫阳性粪样均无交叉反应,分别使用不同保存期(1个月、2个月、3个月、4个月)和不同储存条件(室温、4℃、37℃)的试纸条均能得到相同的结果。应用所建立的胶体金试纸条检测方法对96份犬粪便样品(其中包括36份新疆地区犬细粒棘球绦虫感染参照样品,60份长春地区临床样品)进行检测,36份参照样品检出率为97.2%(35/36),60份临床样品结果均为阴性。
【关键词】：细粒棘球绦虫 Dot-ELISA 胶体金试纸条 检测方法
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.292
【目录】：
- 中文摘要5-7
- Abstract7-11
- 前言11-13
- 第一篇 文献综述13-27
- 第1章 犬细粒棘球绦虫诊断方法的研究进展13-27
- 1.1 病原学13-17
- 1.2 常规诊断方法17-18
- 1.3 免疫学诊断方法18-22
- 1.4 分子生物学诊断方法22-25
- 1.5 防治措施25-27
- 第二篇 研究内容27-62
- 第1章 EdiagA864抗原的制备及抗体的纯化与标记27-37
- 1.1 材料27-29
- 1.2 方法29-33
- 1.3 结果33-35
- 1.4 讨论35-36
- 1.5 小结36-37
- 第2章 犬细粒棘球绦虫感染Dot-ELISA检测方法的建立37-47
- 2.1 材料37
- 2.2 方法37-40
- 2.3 结果40-43
- 2.4 讨论43-45
- 2.5 小结45-47
- 第3章 犬细粒棘球绦虫感染检测胶体金试纸条的研制47-62
- 3.1 材料47-49
- 3.2 方法49-52
- 3.3 结果52-58
- 3.4 讨论58-60
- 3.5 小结60-62
- 结论62-63
- 参考文献63-71
- 导师简介71-72
- 作者简介及科研成果72-73
- 致谢73
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