高致病性鸡痘病毒灭活疫苗的制备

发布时间：2017-05-21 22:25

  本文关键词：高致病性鸡痘病毒灭活疫苗的制备，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：鸡痘是由鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)引起的一种急性、接触性传染病,广泛发生于养禽业中,各年龄和品种均易感,但以雏鸡的敏感性最高,在临床上主要表现为皮肤型、黏膜型和混合型。该病在世界范围内均有发生,主要使用鸽痘疫苗和鸡痘鹌鹑化弱毒疫苗进行免疫预防。近年来,由于毒株变异引发的FPV感染报道不断增加,给养禽业造成极大的经济损失。特别是2009年发生于吉林省公主岭某大型种鸡场的一起皮肤型鸡痘疫情,导致1万只褐种蛋鸡于46日龄发病后10日内全部死亡,给该病的有效防控再次敲响了警钟,同时也给现有的部分商品化疫苗的有效性带来了挑战。为了进一步完善鸡痘疫苗的免疫保护效果,本研究以当前流行的鸡痘病毒为种毒开展了灭活疫苗的实验室研究工作。课题组前期从吉林省公主岭暴发的皮肤型鸡痘疫情病死鸡体内分离获得一株高致病性鸡痘病毒,命名为FPV JL 09C2。经基因组测序发现,该FPV基因组内整合了近全长的禽网状内皮组织增生病病毒(REV)的基因。本研究选用FPV JL 09C2型毒株作为种毒,进行了高致病性鸡痘病毒灭活疫苗的研究。通过试验确定毒株在鸡胚上最佳的接毒剂量和收毒时间,即用150 ul病毒液接种SPF鸡胚培养5 d后收毒为最佳条件。在此条件下对病毒扩大培养,并选用甲醛作为灭活剂对病毒进行灭活,确定3‰的甲醛处理24 h可使病毒完全灭活。依据《兽用生物制品规程》配制铝胶佐剂,按与灭活病毒1:9的比例混合,制备好的疫苗按照国家标准进行细菌检验,采用PCR扩增技术对支原体进行检验。按照上述生产工艺制备鸡痘病毒灭活疫苗进行后续的研究。对研制的灭活疫苗进行了最小免疫剂量的测定以及免疫效果的评价。研究结果显示,该疫苗对雏鸡的最小免疫剂量是0.2 ml。随后对制备的疫苗进行安全性检验,结果显示,以一次单剂量、单剂量重复和一次超剂量接种实验动物后,经临床观察、体温测定和病理观察等证明本疫苗不产生临床副作用,具有良好的安全性。通过ELISA检测,雏鸡接种疫苗后2-3周FPV抗体水平达到最高,最高OD450可达到0.55,但各组血清中均未检测到REV抗体的存在;淋巴细胞增殖实验检测,与PBS组相比,灭活疫苗组CD3+CD4+T淋巴细胞百分比升高CD3+CD8+T淋巴细胞的百分比无明显变化;灭活疫苗免疫组和经特异性抗原刺激后,处于高度活化状态;对细胞因子检测证明该疫苗可刺激鸡产生特异性的免疫应答,且以Th2型免疫应答为主。通过对接种疫苗的鸡攻毒,保护率可达到85%,对疫苗的保存期进行测定,疫苗在4℃和室温环境下分别保存9和3个月,其物理性状以及免疫效力未变化,这与灭活疫苗特性相同。由此可见,本实验室制备的FPV灭活疫苗可以有效的刺激机体产生免疫应答,从而达到预防该病的目的。该疫苗的研制对鸡痘有效预防具有重要意义。
【关键词】：鸡痘病毒 灭活疫苗 免疫应答 抗体
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.4
【目录】：

• 摘要4-6
• abstract6-12
• 前言12-13
• 第一篇 文献综述13-26
• 第1章 鸡痘病毒研究进展13-23
• 1.1 定义与分类13-14
• 1.2 鸡痘病毒形态结构和理化特性14
• 1.3 鸡痘病毒的分子生物学特点14-16
• 1.4 鸡痘病毒的致病性16-17
• 1.5 FPV感染的诊断17-18
• 1.6 鸡痘病毒的免疫特性18-19
• 1.7 鸡痘的预防和治疗19-20
• 1.8 FPV与禽网状内皮增生病病毒的整合20-23
• 第二章 鸡痘疫苗的研究进展23-26
• 第二篇 研究内容26-51
• 第一章 高致病性鸡痘病毒JL 09C2灭活疫苗的制备26-38
• 1 材料与方法26-31
• 2 结果31-35
• 3 讨论35-37
• 4 小结37-38
• 第二章 高致病性鸡痘病毒JL 09C2株灭活疫苗的保护性及安全性研究38-51
• 1 材料与方法38-42
• 2 结果42-49
• 3 讨论49-50
• 4 小结50-51
• 结论51-52
• 参考文献52-59
• 导师简介59-60
• 作者简介60-61
• 致谢61

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本文编号：385035