GPX1通过NFκB通路调节COX2参与哺乳动物分娩启动

发布时间：2023-09-14 01:03

　　分娩启动是一个复杂的生理过程,影响因素有很多,包括机体内部环境和外界环境两方面。外界因素包括摄入食物、不当的机械运动等;内在调节主要包括激素、免疫炎症以及细胞凋亡等。目前关于分娩启动过程具体分子机制的研究鲜有报道。在本实验室大白猪分娩前后胎盘组织转录本测序中筛选出GPX1差异表达基因,有研究表明GPX1可以缓解氧化应激反应,GPX1缺乏会导致非正常分娩。本试验旨在探究谷胱甘肽过氧化物酶GPX1在分娩启动的进程中的作用。为了探究GPX1是否在分娩启动中发挥作用,我们在怀孕15.5天孕鼠腹腔注射LPS构建小鼠早产模型,检测胎膜中ROS水平、氧化标志基因HSP90、炎症因子TNFα、IL1β以及分娩相关基因COX2的表达变化。在WISH细胞中分别转染干涉片段si-GPX1和超表达质粒,检测分娩相关基因HSP90、COX2、Caspase3、IL1β以及NFκB。为了判断GPX1发挥作用的通路,采用NFκB通路抑制剂CAPE处理WISH细胞,通过细胞免疫荧光检测NFκB以及COX2的表达变化。通过ELISA检测清平猪有无分娩征兆的羊水中PGE2的浓度。在WISH细胞中转染重组质粒pCMV-GP...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
第一章 文献综述
    1 前言
    2 分娩启动的研究进展
        2.1 胎膜破裂在分娩启动中的作用
        2.2 激素在分娩启动中的作用
        2.3 免疫炎症在分娩启动中的作用
        2.4 氧化应激与分娩启动
        2.5 GPXs简介
        2.6 NFκB参与分娩启动
        2.7 研究目的与意义
第二章 材料和方法
    1 试验材料
        1.1 活体试验
        1.2 试验样品
        1.3 菌株、载体和细胞系
        1.4 主要试剂和仪器
        1.5 主要溶液的配制
    2 试验方法
        2.1 超表达载体的构建
        2.2 细胞的培养
        2.3 脂质体介导的细胞转染(6孔板)
        2.4 荧光定量PCR分析
        2.5 WesternBlot试验方法
        2.6 酶联免疫吸附测定(ELISA)分析
        2.7 细胞免疫荧光分析
        2.8 生物学工具
        2.9 统计学分析
第三章 结果与分析
    1 GPX1、COX2在早产鼠中上调表达
    2 GPX1真核超表达质粒的构建
    3 GPX1正向调节COX2的表达
    4 GPX1通过NFκB调节COX2的表达
    5 GPX1通过NFκB通路调节COX2的表达影响前列腺激素水平
    6 PGE2反馈调节GPX1、NFκB和COX2的表达
第四章 讨论
    1 早产鼠模型中氧化应激水平显著上升
    2 GPX1在WISH细胞中对NFκB通路的调控
    3 GPX1通过NFκB通路对PGE2水平的调控
    4 PGE2对GPX1、NFκB与COX2的反馈调控
第五章 总结
    1 主要结论
    2 本研究创新之处
    3 本研究的不足之处
    4 下一步工作计划
参考文献
研究生在读期间发表的论文
致谢



本文编号：3846247