饲用芽孢杆菌先天抗鲎素筛选及后天抗鲎素选育研究

发布时间：2023-09-14 01:14

　　鲎素(Tachyplesin Ⅰ)是一种从鲎的血液中提取的由17个氨基酸残基组成的阳离子抗菌肽,具有广谱抗细菌、真菌、霉菌、病毒、原虫、抑制肿瘤细胞增殖和诱导癌细胞分化等多种生物活性,是一种具有巨大潜在应用价值的肽类抗生素；然而由于鲎素对宿主菌的强烈的抑杀作用使得难于实现其基因工程高效表达,这严重制约了鲎素的研究和应用。本实验通过先天抗鲎素筛选和后天连续耐鲎素诱导选育两种方法来筛选抗鲎素的饲用芽孢杆菌菌株,以期得到抗鲎素的宿主菌,解决鲎素对宿主菌的强烈抑杀这一关键难题。本论文的内容包括以下几个部分：1、采用肉汤微量稀释法测定了鲎素对枯草芽孢杆菌BS168和WB800、环状芽孢杆菌CICC22015、迟缓芽孢杆菌CICC10365、坚强芽孢杆菌CICC23258、纳豆芽孢杆菌CICC20443、短小芽孢杆菌CICC9003、凝结芽孢杆菌AS 1.2009、巨大芽孢杆菌AS1.223、地衣芽孢杆菌AS1.269和蜡状芽孢杆菌AS1.196的抑杀活性；结果鲎素对它们的MIC(最小抑菌浓度)分别为20、20、20、2.5、40、40、20、20、20、20、20ug/ml,MBC(最小杀菌浓度...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 鲎及鲎素的研究进展
        1.1.1 鲎的种类及分布
        1.1.2 鲎源抗菌肽
        1.1.3 鲎素的抗菌能力
        1.1.4 鲎素的应用前景
        1.1.5 鲎素的抗菌机制
        1.1.6 鲎素的来源
        1.1.7 鲎素的基因工程表达现状
    1.2 细菌对菌肽产生抗药性研究进展
        1.2.1 细菌对抗菌肽抗药性的出现
        1.2.2 细菌对抗菌肽AMPs抗药性的分类
        1.2.3 细菌对抗菌肽AMPs的抗药性机制
    1.3 本论文的立题依据和研究内容
第二章 鲎素对几种饲用芽孢杆菌的抑杀作用
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1. 实验材料
        2.2.2. 实验方法
    2.3 结果与分析
    2.4 讨论
    2.5 本章小结
第三章 枯草芽孢杆菌BS168抗药性致死突变标志微波诱变筛选研究
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 鲎素对枯草芽孢杆菌BS168致死浓度的测定
        3.3.2 微波诱变剂量的测定
        3.3.3 微波诱变结果
        3.3.4 微波诱变前后原始菌和诱变菌MIC的测定
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
第四章 枯草芽孢杆菌BS168耐鲎素诱导及原始菌和诱导菌生理生化研究
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1. 实验菌株
        4.2.2. 鲎素溶液的配制
        4.2.3. 培养基和试剂的配制
        4.2.4. 主要的仪器设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 体外耐药性的诱导试验
        4.3.2 体外药敏试验的测定
        4.3.3 高抗药菌株抗药稳定性检测
        4.3.4 鲎素对BS168原始菌和诱导菌QP抑菌动力学的研究
        4.3.5 鲎素对枯草芽孢杆菌BS168原始菌和诱导菌QP细胞膜渗透性的影响
        4.3.6 电镜下观察鲎素对细菌诱导前后的形态学及超微结构变化
    4.4 结果与分析
        4.4.1 鲎素浓度逐级递增营养肉汤诱导法
        4.4.2 高抗药菌株(QP)抗药稳定性检测
        4.4.3 鲎素对BS168原始菌和诱导菌QP抑菌动力学的研究
        4.4.4 鲎素对枯草芽孢杆菌BS168原始菌和诱导菌QP细胞膜渗透性的影响
        4.4.5 鲎素诱导前后菌的超微结构的变化
    4.5 讨论
    4.6 本章小结
第五章 诱导菌耐鲎素相关机制分析
    5.1 引言
    5.2 材料
        5.2.1 实验菌种
        5.2.2 主要仪器设备
        5.2.3 实验试剂
    5.3 实验方法
        5.3.1 枯草芽孢杆菌BS168原始菌和不同鲎素浓度诱导菌胞外蛋白酶酶活的测定
        5.3.2 鲎素长期诱导对菌株细胞壁膜负电荷数影响的测定
        5.3.3 BS168原始菌和诱导菌胞外蛋白酶酶谱检测
        5.3.4 BS168原始菌和诱导菌胞外蛋白酶的双向电泳分析
    5.4 结果与分析
        5.4.1 枯草芽孢杆菌BS168原始菌和诱导菌胞外蛋白酶酶活的测定
        5.4.2 鲎素长期诱导对菌株细胞壁膜负电荷数影响的测定
        5.4.3 BS168原始菌和诱导菌胞外蛋白酶酶谱检测
        5.4.4 BS168原始菌和诱导菌胞外蛋白酶的双向电泳分析
    5.5 讨论
        5.5.1 枯草芽孢杆菌BS168原始菌和诱导菌胞外蛋白酶酶活比较
        5.5.2 枯草芽孢杆菌BS168原始菌和诱导菌胞外蛋白酶酶谱分析
        5.5.3 鲎素长期诱导对枯草芽孢杆菌细胞壁膜负电荷的影响
        5.5.4 BS168原始菌和诱导菌胞外蛋白酶的双向电泳凝胶图谱分析
    5.6 本章小结
总结与展望
    本文总结
    展望
    本论文创新之处
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3846263