SUMO-1在小鼠卵巢颗粒细胞中的作用和机制研究

发布时间：2023-09-14 01:43

　　细胞的正常生命活动涉及到各种蛋白质翻译后修饰方式的调控,这些修饰能调节蛋白质生物学功能及细胞信号网络。虽然这并不改变蛋白质合成和降解的速度,但可能影响蛋白质的功能,因此增加了蛋白质功能研究的复杂性。蛋白质翻译后修饰的方式和形式有很多种。SUMO (small ubiquitin-related modifier,小泛素相关修饰物)是一类结构与泛素类似的小分子修饰物(Ubls)。目前,在哺乳动物中已存在SUMO-1, SUMO-2, SUMO-3和SUMO-4四种SUMO分子。SUMO-1则是一种分子量约12 KDa,在真核生物中广泛存在SUMO分子。通过E1、E2以及E3酶的催化作用,与底物蛋白相结合而起作用。这一特异性的结合过程叫做SUMO化(SUMOylation). SUMO化作为一种动态可逆的蛋白翻译后修饰方式之一,能被SUMO特异性蛋白酶(SENP)所逆转,这一动态平衡参与调控真核细胞多种生物学过程,如细胞周期,细胞凋亡,细胞增殖和分化、两种或多种蛋白质之间的相互作用,信号传导,调节靶蛋白分子的细胞定位／转运、稳定性、转录活性和生物学活性等等。在哺乳动物中,增殖和分化的卵巢颗...

【文章页数】：141 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
缩略词表(Abbreviation words)
第一章 文献综述
    1 蛋白质的翻译后修饰研究进展
        1.1 糖基化
        1.2 甲基化
        1.3 乙酰化
        1.4 磷酸化
        1.5 泛素化
    2 SUMO基因的研究进展
        2.1 SUMO家族
        2.2 SUMO化修饰过程及其酶体系
            2.2.1 SUMO化修饰过程
            2.2.2 SUMO化酶体系
        2.3 SUMO化修饰的底物蛋白研究
        2.4 SUMO化修饰的生物学功能
            2.4.1 调节蛋白间的互作
            2.4.2 调节蛋白定位
            2.4.3 调节蛋白的核浆转运
            2.4.4 调节信号通路,影响转录活性
            2.4.5 维持染色体的正常结构和功能
            2.4.6 SUMO化与细胞凋亡
    3 PTX3
        3.1 PTX3的组成和结构
        3.2 PTX3的作用
    4 颗粒细胞对卵泡发育的影响
        4.1 卵泡发育过程
        4.2 颗粒细胞的发育过程
        4.3 颗粒细胞对卵泡发育的影响
        4.4 颗粒细胞的凋亡
    5 研究的目的和意义
第二章 SUMO-1和UBC9真核表达载体的构建及鉴定
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要生化材料及试剂
            2.1.2 主要仪器设备
        2.2 方法
            2.2.1 小鼠颗粒细胞总RNA提取
            2.2.2 反转录cDNA
            2.2.3 SUMO-1及UBC9引物的设计及片段的扩增
            2.2.4 PCR产物回收和纯化
            2.2.5 连接反应、转化、挑选阳性克隆、测序验证以及质粒抽提
            2.2.6 重组质粒的构建
    3 结果
        3.1 小鼠颗粒细胞总RNA结果检测
        3.2 SUMO-1及UBC9基因片段扩增
        3.3 SUMO-1及UBC9各种重组载体的构建和鉴定
        3.4 质粒测序鉴定
    4 讨论
    5. 小结
第三章 SUMO-1及UBC9对小鼠卵巢颗粒细胞的作用研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 实验动物、材料及试剂
            2.1.2 主要仪器设备
        2.2 方法
            2.2.1 卵巢颗粒细胞培养
            2.2.2 颗粒细胞转染
            2.2.3 细胞周期检测
            2.2.4 细胞凋亡检测
            2.2.5 细胞增殖检测
            2.2.6 Western Blotting(WB)
            2.2.7 免疫组织化学(IHC)
            2.2.8 免疫细胞化学(ICC)
    3 结果
        3.1 pEGFP-C1-SUMO-1及pEGFP-C1-UBC9重组质粒转染小鼠颗粒细胞
        3.2 SUMO-1及UBC9在小鼠卵巢及颗粒细胞中的表达规律
        3.3 SUMO-1及UBC9在小鼠卵巢中的定位
        3.4 SUMO-1及UBC9对小鼠颗粒细胞亚细胞定位的影响
        3.5 SUMO-1及UBC9对颗粒细胞周期的影响
        3.6 SUMO-1及UBC9对颗粒细胞增殖的影响
        3.7 SUMO-1及UBC9对颗粒细胞凋亡的影响
    4 讨论
        4.1 SUMO-1和UBC9在卵巢及颗粒细胞中表达的作用
        4.2 SUMO-1和UBC9对细胞定位的影响
        4.3 SUMO-1和UBC9对颗粒细胞周期、增殖和凋亡的调控
    5 小结
第四章 PTX3的SUMO-1修饰在小鼠卵巢颗粒细胞中的研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器设备
        2.2 方法
            2.2.1 PTX3片段合成
            2.2.2 PTX3片段回收和纯化
            2.2.3 PTX3重组质粒的构建
            2.2.4 卵巢颗粒细胞培养及转染
            2.2.5 Western Blotting(WB)
            2.2.6 免疫细胞化学(ICC)
            2.2.7 免疫共沉淀(IP)
    3 结果
        3.1 PTX3真核表达载体的构建
            3.1.1 PTX3的SUMO化位点预测
            3.1.2 PTX3及PTX3^k203R目的片段的扩增
            3.1.3 pCMV-N-HA-PTX3/pCMV-N-HA-PTX3^K203R基因真核表达载体的构建和鉴定
            3.1.4 质粒测序鉴定
        3.2 PTX3的SUMO-1修饰对颗粒细胞的影响
            3.2.1 PTX3的SUMO-1修饰位点检测及其蛋白表达情况研究
            3.2.2 PTX3的SUMO-1修饰对其在颗粒细胞定位的影响
    4 讨论
    5 小结
结论
研究创新点与不足
参考文献
附录Ⅰ 发表的主要文章
附录Ⅱ 在Genbank登录的基因片段
附录Ⅲ 出版的书籍
附录Ⅳ 参加的学术活动
致谢



本文编号：3846308