马传染性贫血病毒疫苗株EIAV FDDV13 及其感染性克隆激活宿主细胞固有免疫应答的比较研究

发布时间：2023-09-16 10:46

　　马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus, EIAV)是严重危害马属动物的慢病毒。上世纪七十至八十年代,哈尔滨兽医研究所沈荣显院士等通过独特的EIAV强毒致弱技术路线,对EIAV的强毒株进行有效地致弱。得到的EIAV弱毒疫苗,是可诱导马属动物产生良好免疫保护并唯一被成功大规模应用的慢病毒疫苗。对该慢病毒疫苗诱导免疫保护机制的研究,有助于破解一直困扰科学界的如何诱导慢病毒保护性免疫的关键问题,具有重要的科学意义。前期开展的工作中,我们发现基于EIAV中国疫苗株EIAVFDDV13制备的疫苗感染性克隆毒株EIAVFDDV3-8未能复制该疫苗株诱导良好保护性免疫的能力。考虑到固有免疫激活与后续特异性免疫应答建立间存在的密切相关性,本研究将对EIAVFDDV13和EIAVFDDV3-8两毒株激活宿主细胞固有免疫应答的特性进行比较研究,尝试对二者在诱导保护性免疫能力上的差异进行解析。 本研究中,我们选择包括TLR-2\3\4、TLR-6\7\8、TLR-9、INF-α、INF-β、IL-6和TNF-α等在内的分子作为评价固有免疫激活差异的指标。原因在于,首先...

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 EIAV生物学特征
        1.1.1 EIAV基因组形态结构及构成
        1.1.2 EIAV临床症状和免疫反应
        1.1.3 EIAV的细胞嗜性
    1.2 EIAV弱毒疫苗株和感染性克隆
        1.2.1 EIAV弱毒疫苗株的致弱路线
        1.2.2 EIAV感染性克隆
    1.3 抗病毒感染的天然免疫
        1.3.1 Toll样受体
    1.4 其他固有免疫的效应分子
    1.5 本研究的目的与意义
第二章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 细胞和病毒
        2.1.2 质粒和菌株
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 荧光定量PCR引物设计
    2.2 方法
        2.2.1 检测病毒Reverse Transcriptase活性
        2.2.2 细胞DNA的提取
        2.2.3 细胞RNA的提取
        2.2.4 病毒RNA的提取
        2.2.5 细胞内病毒载量及整合效率的定量分析
        2.2.6 病毒在马巨噬细胞上诱导细胞凋亡
        2.2.7 应用相对荧光定量方法检测固有免疫相关分子表达
        2.2.8 ELISA检测蛋白表达量
        2.2.9 确定病毒感染细胞的TCIDso
第三章 结果
    3.1 病毒感染剂量的确定
    3.2 EIAV_FDDV13和EIAV_FDDV3-8二者致细胞凋亡作用的比较
    3.3 EIAV_FDDV13和EIAV_FDDV3-8二者在EMDMs内的复制动态监测
    3.4 EMDMs感染EIAV_FDDV13和EIAV_FDDV3-8后TLRs的激活现象
    3.5 EIAVFDDV13和EIAV_FDDV3-8感染宿主细胞EMDMs后细胞内Ⅰ型干扰素的表达差异分析
    3.6 EIAV_FDDV13和EIAV_FDDV3-8感染宿主细胞EMDMs后TNF-A和IL-6的表达情况
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3846878