山羊c-KIT和SCF基因在皮肤中的表达及与毛色关系研究

发布时间：2023-10-16 20:18

　　本研究旨在探索c-KIT基因及SCF基因在不同毛色山羊皮肤中的表达及与成熟黑素细胞数量关系，并筛选出与山羊毛色相关的c-KIT基因及其配体SCF基因的SNPs标记，以期对毛色性状的分子育种实践提供理论基础。 研究中对SCF基因mRNA存在的不同剪接类型进行探究，发现存在可溶型（KC794711.1），跨膜型（KC794712.1）和类跨膜型（KC794713.1）三种剪接形式。选择TYR基因作为成熟黑素细胞的标志分子，利用实时荧光定量PCR技术对黑色和白色山羊皮肤组织中c-KIT、SCF以及TYR等毛色相关基因表达量进行研究，结果发现：黑色被毛山羊皮肤组织中TYR基因mRNA表达量是白色被毛山羊的8.280倍；c-KIT基因mRNA表达量是白色被毛山羊的1.255倍；可溶性SCF基因mRNA表达量是白色被毛山羊的0.267倍；跨膜型SCF基因mRNA表达量是白色被毛山羊的0.874倍；类跨膜型SCF基因mRNA表达量是白色被毛山羊的0.103倍。可溶性SCF和类跨膜型SCF基因mRNA表达量之和在黑白山羊个体间差异显著（P<0.05），可能与黑白毛色的形成有关。 本研究利用免疫组...

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1. 引言
    1.1. 哺乳动物的毛色
    1.2. 山羊毛色性状及其价值
    1.3. 被毛颜色的形成
    1.4. “上位白”基因座位和 SCF/c-KIT 信号途径
    1.5. SCF/c-KIT 信号途径参与影响哺乳动物毛色的形成
    1.6. SCF/c-KIT 信号途径的重要功能和研究现状
    1.7. 本课题组对山羊 SCF/c-KIT 信号途径研究成果
    1.8. 本研究的目的、意义及主要内容
2. 材料与方法
    2.1. 试验材料
        2.1.1. 试验动物和样本采集
        2.1.2. 主要试剂及溶液的配制
        2.1.3. 试验过程中使用的设备及仪器
        2.1.4. 研究中使用的生物信息学软件
    2.2. 试验方法和步骤
        2.2.1. RNA 的提取
        2.2.2. RNA 的纯化
        2.2.3. cDNA 第一链的合成
        2.2.4. RT-PCR 实验引物的设计
        2.2.5. 荧光实时定量 PCR 实验引物的设计
        2.2.6. PCR 反应体系与条件
        2.2.7. 标准品的制备
        2.2.8. 标准曲线建立和实时荧光定量 PCR
        2.2.9. 石蜡切片制作
        2.2.10. 免疫组织化学
        2.2.11. DNA 的提取
        2.2.12. DNA 浓度和纯度的检测及测定
        2.2.13. 筛选 SNPs 实验 PCR 引物的设计
        2.2.14. PCR 扩增、测序以及数据分析
3. 结果与分析
    3.1. SCF 基因不同剪接变体及 c-KIT，SCF 与 TYR 基因表达关系研究
        3.1.1. 山羊皮肤组织 mRNA 的提取和纯化
        3.1.2. SCF 基因不同剪接变体的 PCR 扩增结果
        3.1.3. 荧光定量 PCR 实验中各待测基因的扩增和克隆
        3.1.4. 阳性克隆的鉴定
        3.1.5. Real-time qPCR 检测 TYR, c-KIT 及各型 SCF 基因在黑白山羊皮肤中的表达
        3.1.6. 不同山羊皮肤中 c-KIT 基因及各型 SCF 基因与 TYR 基因 mRNA 变化规律
        3.1.7. c-KIT 基因和 SCF 基因与 TYR 基因表达关系
    3.2. c-KIT 在不同毛色山羊皮肤分布规律研究
    3.3. c-KIT 基因和 SCF 基因组序列多态性研究
        3.3.1. DNA 的提取
        3.3.2. PCR 扩增结果
        3.3.3. 测序结果比对分析
        3.3.4. 研究中发现的 c-SNPs
        3.3.5. c-KIT 基因上 4 个 cSNPs 的遗传多样性分析
        3.3.6. c-KIT 基因多态位点的遗传多样性分析
        3.3.7. SCF 基因多态位点的遗传多样性分析
4. 讨论
    4.1. 实验过程讨论
        4.1.1. 样品采集和核酸提取
        4.1.2. PCR 扩增
        4.1.3. 实时荧光定量 PCR 试验
        4.1.4. 毛囊切片制备
        4.1.5. IHC 实验
    4.2. 实验结果分析讨论
        4.2.1. SCF 基因中的不同剪接变体及 c-KIT，SCF 与 TYR 基因表达定量
        4.2.2. c-KIT 的表达分布
        4.2.3. 多态位点的遗传多样性分析
5. 结论
参考文献
作者简历
在读期间已发表论文
致谢



本文编号：3854583