表达猪瘟病毒E2蛋白的重组PRV变异株rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2的构建及免疫效力

发布时间：2023-10-16 20:10

　　猪瘟(classical swine fever, CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)引起的一种烈性传染病,对养猪业能够造成严重的经济损失。目前国内外广泛应用的CSF疫苗是兔化弱毒疫苗C株,虽然该疫苗对CSF的防控发挥了主要作用,但由于其不能区分疫苗免疫和CSF野毒感染,易受母源抗体干扰而常导致免疫减效或失败等原因,致使CSF在我国未能得到有效控制。因此,研制一种安全高效且具有标记特征的新型疫苗对我国控制及净化CSF具有重大意义。伪狂犬病(pseudorabies, PR)是由伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)引起的多种家畜及野生动物的以发热、奇痒、脑脊髓炎、呼吸和神经系统障碍为主要特征的急性传染病。目前主要用于防控该病的疫苗是弱毒疫苗(MLV)Bartha-K61,欧美发达国家也通过接种该疫苗有效控制及根除了PRV。然而,白2011年以来我国大部分省份相继爆发及流行了PR新疫情,给我国养猪业造成了严重的经济损失。随后多项研究结果表明,PRV在我国已经发生变异,毒力相对于PRV经典株(双城株)明显增强,...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 猪瘟概述
        1.1.1 猪瘟
        1.1.2 猪瘟病毒
    1.2 猪瘟新型疫苗研究进展
        1.2.1 活病毒载体疫苗
        1.2.2 单位疫苗
        1.2.3 DNA疫苗
        1.2.4 嵌合猪瘟疫苗
    1.3 伪狂犬病概述
        1.3.1 伪狂犬病
        1.3.2 伪狂犬病病毒
        1.3.3 PRV感染神经系统的研究进展
        1.3.4 PRV作为疫苗载体的研究进展
    1.4 伪狂犬病新疫情的爆发
    1.5 PRV变异株疫苗的研究进展
    1.6 研究目的与意义
第二章 rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2的构建及免疫效力评价
    2.1 材料和方法
        2.1.1 病毒、疫苗、质粒、细胞和抗体
        2.1.2 主要试剂及溶液
        2.1.3 主要仪器及设备
        2.1.4 实验动物
        2.1.5 病毒基因组的提取
        2.1.6 质粒的提取
        2.1.7 rPRVTJ-delgE/gI/TK-EGFP的拯救、纯化和鉴定
        2.1.8 rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2拯救和纯化
        2.1.9 rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2的PCR、IFA与Western blotting鉴定
        2.1.10 rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2一步生长曲线
        2.1.11 rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2免疫猪对CSFV的攻毒保护实验
        2.1.12 rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2免疫猪对PRV的攻毒保护实验
        2.1.13 特异性抗体检测和病毒中和试验
        2.1.14 免疫及攻毒后排毒检测
        2.1.15 荧光定量RT-PCR
        2.1.16 剖检组织病理变化
        2.1.17 数据统计学分析
    2.2 结果
        2.2.1 重组病毒rPRVTJ-delgE/gI/TK-EGFP和rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2的获得和鉴定
        2.2.2 一步生长曲线
        2.2.3 rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2对仔猪的安全性
        2.2.4 rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2诱导仔猪产生的E2特异性抗体和抗CSFV的中和抗体
        2.2.5 rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2免疫猪对CSFV产生的攻毒保护
        2.2.6 rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2免疫猪后诱导的gB抗体及抗PRV的中和抗体
        2.2.7 rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2免疫猪对PRV产生的攻毒保护
    2.3 讨论
全文结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介



本文编号：3854569