禽致病性大肠杆菌PhoP/Q蛋白的表达纯化及其毒力调控分析

发布时间：2023-10-19 20:32

　　禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)能引起禽类高死亡率给养禽业的发展带来重大危害。存在于APEC中的PhoP/Q二元调控系统是由菌体外膜蛋白PhoQ感应外界环境变化,继而将信号传递给PhoP,PhoP能够调控病原菌毒力基因表达,这对菌体侵袭机体上皮细胞导致机体致病起着关键作用。探索PhoQ介导PhoP调控的APEC毒力基因靶点,针对APEC检测受PhoP调控的外膜蛋白、内毒素等毒力相关基因,为后续进一步明确PhoP/Q调控系统对APEC毒力的影响奠定了基础。为探讨由PhoQ介导的PhoP对毒力基因的调控作用,本实验从基因调控角度入手通过禽致病性大肠杆菌phoP/Q基因的原核表达获得其蛋白产物,检测受PhoP蛋白调控的毒力相关基因;同时,得到了PhoQ蛋白为实验室对PhoQ的研究提供了材料。本实验为后续进一步研究PhoP/Q二元调控系统对禽致病性大肠杆菌毒力的调控功能和作用机理提供一些参考。具体内容和结果如下:1禽致病性大肠杆菌PhoP/Q蛋白的表达根据NCBI中报道的APEC phoP/Q基因编码区序列(GenBank登录号C...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩写词表
文献综述
引言
主要技术路线
1 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 菌株与载体
        1.1.2 主要工具酶及试剂盒
        1.1.3 其他相关试剂
        1.1.4 标准参照物
        1.1.5 缓冲液的配制
        1.1.6 仪器设备
    1.2 实验方法
        1.2.1 目的基因的合成
        1.2.2 表达载体pET32a-phoP/Q的构建
        1.2.3 重组PhoP蛋白的诱导表达
        1.2.4 重组PhoP蛋白的Ni-NTA纯化
        1.2.5 重组PhoQ蛋白的诱导表达
        1.2.6 重组PhoQ蛋白的Ni-NTA纯化
        1.2.7 禽致病性大肠杆菌PhoP蛋白与毒力基因的相关性分析
2 结果与分析
    2.1 表达载体pET32a-phoP/Q的构建
    2.2 重组PhoP蛋白的诱导表达
        2.2.1 重组PhoP蛋白的IPTG诱导表达
        2.2.2 重组PhoP蛋白诱导温度的优化
        2.2.3 重组PhoP蛋白IPTG诱导浓度的优化
    2.3 重组PhoP蛋白的Ni-NTA纯化
    2.4 重组PhoQ蛋白的诱导表达
    2.5 重组PhoQ蛋白的Ni-NTA纯化
    2.6 禽致病性大肠杆菌PhoP蛋白与毒力基因的相关性分析
        2.6.1 禽致病性大肠杆菌毒力相关基因的获得
        2.6.2 禽致病性大肠杆菌PhoP与毒力相关基因启动子的结合检测分析
3 讨论
    3.1 禽致病性大肠杆菌phoP/Q基因的序列分析
    3.2 表达菌株和载体的选择
    3.3 禽致病性大肠杆菌PhoP/Q重组蛋白的表达及纯化
    3.4 禽致病性大肠杆菌PhoP蛋白与毒力基因的相关性分析
    3.5 本实验的安排依据及后续研究
4 结论
参考文献
致谢
个人简介



本文编号：3855356