猪圆环病毒2型病毒样颗粒的高效组装技术研究

发布时间：2023-10-22 09:41

　　目的:探索猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLPs)的高效组装技术,提高VLPs的稳定性。方法:利用大肠杆菌表达PCV2 Cap蛋白自组装为VLPs,分析不同离子强度下VLPs的稳定性。利用切向流技术添加尿素,降低p H,可使VLPs解组装,利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析纯化获得Cap蛋白,去除尿素,提高离子强度和pH,实现VLPs的高效再组装。结果:PCV2 Cap蛋白自组装VLPs在150mmol/L NaCl下稳定性较差,而在500mmol/L NaCl下可提高VLPs的稳定性,但仍较易发生聚集,核酸含量均较高。在150mmol/L NaCl、300mmol/L尿素和p H 5.5的缓冲体系条件下,能够使VLPs解组装。经25%～50%饱和硫酸铵(V/V)分级沉淀粗纯,阴离子交换层析500mmol/L NaCl下洗脱获得精纯Cap蛋白,蛋白质纯度≥95%,并能够有效去除核酸。通过切向流技术去除体系中的尿素,并将NaCl浓度提高至1mol/L、p H提高至8.0,改变蛋白质表面静电荷分布,实现VLPs的高效、均一再组装,组装效率≥99%,回收率为65.85%,并明显提高V...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株
    1.2 主要仪器和试剂
    1.3 PCV2 r Cap蛋白的表达与纯化
    1.4 VLPs的粒径检测和Zeta电位检测
    1.5 VLPs的透射电镜(TEM)检测
    1.6 VLPs的高效液相尺寸排阻色谱(HPSEC)检测
2 结果
    2.1 PCV2 r Cap蛋白的纯化与自组装VLPs的鉴定
    2.2 自组装PCV2 VLPs的稳定性
    2.3 PCV2 VLPs的解组装
    2.4 解组装PCV2 r Cap蛋白的纯化
    2.5 PCV2 VLPs的再组装
    2.6 再组装PCV2 VLPs的稳定性
3 讨论



本文编号：3856264