牛疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的表达、纯化及抗原性检测

发布时间：2023-10-22 10:53

　　为了能表达出具有良好免疫原性的牛疱疹病毒Ⅰ型(BoHV-1)gD蛋白,为进一步建立BoHV-1检测方法奠定基础,试验将BoHV-1 gD蛋白的基因片段通过PCR扩增、连接、转化的方法连接到pGEX-6P-1载体上,经过单双酶切鉴定、PCR鉴定后测序。测序结果与NCBI上公布的BoHV-1 gD蛋白的氨基酸序列进行对比,并通过SDS-PAGE、Western-blot以及ELISA检测方法对蛋白质表达情况、抗原性进行检测分析。结果表明:gD基因成功插入pMD18-T载体中,将测序结果与已经发表在NCBI上的BoHV-1 gD蛋白基因比对,相似性为98%,共有19个碱基发生突变,并无碱基插入或缺失。通过软件翻译与原始氨基酸序列(AFB76672.1)进行比对,共有8个氨基酸发生突变。将gD基因插入pGEX-6p-1载体中,命名为pGEX-6p-gD质粒,构建的pGEX-6P-gD/BL21(DE3)重组菌表达出的蛋白质与目的蛋白质大小一致,且该蛋白质免疫后小鼠血清特异性识别BoHV-1。说明本试验成功表达出具有部分免疫原性的BoHV-1重组gD蛋白。

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 菌株、病毒、细胞
    1.2 试验动物
    1.3 主要试剂
2 方法
    2.1 引物的设计与合成
    2.2 基因组DNA模板的提取
    2.3 目的基因US6的扩增
    2.4 T载体的连接及测序分析
    2.5 重组质粒的构建及鉴定
    2.6 重组菌的诱导表达及纯化
    2.7 重组蛋白 Western-blot分析
    2.8 重组蛋白的抗原性鉴定
3 结果与分析
    3.1 BoHV-1 gD基因的PCR扩增
    3.2 T载体的连接及测序鉴定
    3.3 重组菌株的构建及鉴定
    3.4 gD蛋白在大肠杆菌中的诱导表达及Western-blot鉴定
    3.5 重组蛋白的抗原性鉴定
4 讨论



本文编号：3856373