泛素介导IBV结构蛋白重组质粒的免疫效应及其“Prime-boost”免疫效果的研究

发布时间：2023-10-30 17:44

　　鸡传染性支气管炎(IB)是一种由γ冠状病毒类的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的具有高度接触性传染性疾病。IB呈世界范围内流行,进化过程中易变异,特别是RNA依赖的RNA聚合酶的特殊复制机制,使得IBV基因组发生高频率的碱基缺失、插入以及野毒株之间、疫苗毒株与野毒株之间的重组事件,从而产生多种血清型或变异新型,不同病毒株之间交叉保护力弱,给世界养禽业造成了巨大的经济损失。IB的防控主要依赖使用灭活疫苗和弱毒疫苗,但常常还有免疫失败的报道。因此急需研制新型疫苗以及对已有的疫苗进行免疫策略的优化,达到增强疫苗抗病毒效应的目的。采用本课题组构建的重组质粒按常规方法进行制备并制成DNA疫苗。在动物实验中设计7个组即pVAX1-Ub-linker-N + pVAX1-Ub-linker-N免疫组、pVAX1-Ub-linker-S1 +pVAX1-Ub-linker-S 免疫组、pVAX1-Ub-linker-N-S1+pVAX1-Ub-linker-N-S1 免疫组、pVAX1-Ub-linker-N-S1 + inactivated vaccine免疫组、H120 + pVAX1-Ub-l...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 鸡传染性支气管炎病毒及其防控研究进展
    1.1 IBV的早期发现与特性
    1.2 IBV结构蛋白及其生物学功能
        1.2.1 纤突蛋白
        1.2.2 膜蛋白
        1.2.3 核衣壳蛋白
        1.2.4 小囊膜蛋白
    1.3 IBV临床症状、病理变化
    1.4 IBV分子遗传变异
    1.5 IBV基因分型与血清分型研究
    1.6 IB疫苗研究概况
        1.6.1 灭活疫苗
        1.6.2 弱毒疫苗
        1.6.3 基因工程疫苗研究进展
    1.7 泛素在增强免疫应答能力的研究进展
    1.8 “PRIME-BOOST”免疫策略的研究
    1.9 开展本课题的目的与意义
第二章 泛素介导IBV结构蛋白重组质粒的免疫效应及其“PRIME-BOOST”免疫效果的研究
    2.1 试验材料
        2.1.1 病毒株
        2.1.2 试验动物
        2.1.3 菌株、融合真核表达质粒
        2.1.4 主要生化试剂
    2.2 试验方法
        2.2.1 灭活疫苗的制备
        2.2.2 DNA疫苗的制备
        2.2.3 重组质粒的双酶切鉴定
        2.2.4 重组质粒的测序鉴定
        2.2.5 DNA疫苗的免疫
        2.2.6 DNA疫苗的“PRIME-BOOST”的免疫策略
        2.2.7 试验材料的采集与处理
    2.3 免疫效应的检测
        2.3.1 免疫鸡血清抗体应答的检测
        2.3.2 流式细胞术检测免疫鸡外周血特异性T细胞的动态变化
        2.3.3 免疫鸡攻毒后主要组织的病毒载量检测
        2.3.4 IBV攻击雏鸡后感染率及保护率
    2.4 数据处理与分析
    2.5 试验结果
        2.5.1 DNA疫苗的制备与鉴定
        2.5.2 重组质粒的测序鉴定
        2.5.3 动物免疫保护试验结果
            2.5.3.1 免疫鸡外周血T淋巴细胞的动态变化
            2.5.3.2 免疫鸡血清抗体滴度的动态变化
            2.5.3.3 免疫鸡对同源、异源毒株攻毒试验的保护效果
    2.6 分析与讨论
        2.6.1 DNA疫苗免疫的讨论与分析
        2.6.2 免疫鸡外周血T淋巴细胞的动态变化与分析
        2.6.3 免疫鸡外周血IBV特异性抗体的动态变化与分析
        2.6.4 不同IBV病毒的免疫攻毒保护率的比较分析
        2.6.5 DNA疫苗的“PRIME-BOOST”免疫策略的效果分析
第三章 结论
参考文献
附录
致谢
个人简历
攻读学位期间论文发表情况及参与的科研项目



本文编号：3858901