鸭坦布苏病毒NS3蛋白的原核表达及其多克隆抗血清的制备

发布时间：2023-11-18 08:11

　　【目的】利用原核表达系统表达鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)的NS3蛋白,并以此制备鼠抗NS3蛋白的多克隆抗血清。【方法】利用PCR扩增鸭坦布苏病毒CQW1株NS3基因片段,然后将其克隆到pET-28a(+)载体,构建重组质粒pET-28a(+)-NS3。将重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中,筛选获得阳性重组菌,经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot试验表明重组NS3蛋白在BL21细胞中成功表达,将重组NS3蛋白切胶纯化后免疫小鼠后收获抗血清。【结果】经间接免疫荧光试验和Western blot试验验证,多克隆抗血清可识别病毒感染细胞过程产生的NS3蛋白和真核表达的NS3蛋白,具有良好的反应性和特异性。【结论】成功制备的DTMUV NS3蛋白的鼠源多克隆血清,将为鸭坦布苏病毒的临床检测和NS3蛋白功能性研究奠定基础。

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 试验材料
    1.2 主要试剂
    1.3 扩增NS3基因引物设计与合成
    1.4 NS3基因的克隆及载体的构建
    1.5 重组NS3蛋白的诱导表达与SDS-PAGE鉴定
    1.6 重组NS3蛋白鼠源多克隆抗血清的制备
    1.7 Western Blot试验
    1.8 IFA试验
2 结果与分析
    2.1 表达载体p ET-28a(+)-NS3的构建与表达
    2.2 重组蛋白的纯化与免疫
    2.3 NS3多克隆抗血清的Western blot检测结果
    2.4 NS3多克隆抗血清IFA检测结果
3 讨论与结论



本文编号：3864896