四川地区猪传染性胸膜肺炎血清学调查研究

发布时间：2024-01-20 13:15

　　胸膜肺炎放线杆菌是引起猪传染性胸膜肺炎的病原菌。为了弄清猪传染性胸膜肺炎在四川省的流行情况,本研究对已经建立的间接ELISA检测APP抗体方法进行了改进和优化,并通过所建立的方法对四川部分地区进行了血清学调查。1、间接ELISA方法检测APP抗体的改进首先,试验制备了猪抗APP标准阳性血清。先培养APP5型菌并用甲醛灭活,制备成含量为1×1010CFU/ml的抗原,对血清中APP抗体为阴性的一月龄断奶猪进行肌肉注射,每两周进行一次,每次2ml,共免疫注射3次；一周以后再通过以APP血清5型活菌耳静脉注射2ml (1×1010CFU/ml)进行加强免疫,之后收集血清进行琼扩检测效价为1：8。随后,改进和优化了间接ELISA检测猪APP抗体方法。采用方阵滴定法确定了APP抗原的最佳包被浓度为1:100 (18.5ug/ml);血清最佳稀释倍数为1：160。通过梯度筛选出兔抗猪IgG-HRP酶标二抗的最佳工作浓度为1：5000。最后,通过与IHA检测方法的比较表明该方法与IHA检测结果相符且敏感性大大高于IHA试剂盒。对猪大肠杆菌、链球菌、多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌和乙型脑炎等阳性血清的检...

【文章页数】：41 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 猪传染性胸膜肺炎的病原学
    1.2 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的发现及流行现状
    1.3 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的传染途径
    1.4 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的血清型
    1.5 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的特征
    1.6 诊断方法
        1.6.1 血清学诊断方法
        1.6.2 分子生物学技术
研究目的
第二章 猪胸膜肺炎放线杆菌抗体间接ELISA检测方法的改进
    2.1 材料
        2.1.1 菌种和相关试剂
        2.1.2 培养基
        2.1.3 ELISA相关试剂和溶液
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 试剂盒
        2.1.6 实验动物
    2.2 方法
        2.2.1 标准阴、阳性血清的制备
        2.2.2 ELISA抗原的制备
        2.2.3 间接ELISA方法的建立
    2.3 结果
        2.3.1 不同时期的血清效价测定
        2.3.2 超声波破碎抗原的浓度测定
        2.3.3 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定
        2.3.4 酶标二抗最佳稀释度的确定
        2.3.5 间接ELISA结果判定标准
        2.3.6 特异性试验
        2.3.7 敏感性和符合率试验
    2.4 讨论
        2.4.1 阳性血清的制备
        2.4.2 对间接ELISA方法的改进
    2.5 结论
第三章 四川部分地区猪传染性胸膜肺炎的血清学调查
    3.1 材料
        3.1.1 试剂
        3.1.2 仪器
    3.2 方法
        3.2.1 血清样品的采集
        3.2.2 间接ELISA操作步骤
        3.2.3 四川地区APP抗体阳性检出率的分析
    3.3 结果
        3.3.1 血清的收集
        3.3.2 猪不同生产阶段胸膜肺炎放线杆菌感染情况
        3.3.3 不同地区胸膜肺炎放线杆菌血清抗体检出情况
        3.3.4 不同饲养模式下猪胸膜肺炎放线杆菌感染情况
    3.4 讨论
    3.5 结论
参考文献
致谢
附录



本文编号：3880908