羊泰勒虫套式PCR检测方法的建立

发布时间：2024-02-01 12:09

　　为了建立一种特异、敏感、快速检测羊泰勒虫方法,以羊泰勒虫主要表面蛋白(MPSP)基因设计引物,建立羊泰勒虫套式PCR检测方法。结果表明,该方法只能扩增出羊泰勒虫,而对照组羊巴贝斯虫、羊无浆体和弓形虫基因组DNA均未扩出目的条带。该方法敏感性是普通PCR的1 000倍,其最低检测到1拷贝数的MPSP基因。对采自吉林珲春地区30份羊血液样本检测发现,套式PCR阳性率为46.6%(14/30),高于普通PCR(40.00%,12/30)和血液涂片染色(23.33%,7/30),三者阳性符合率为100%。结果表明,所建立的套式PCR可用于羊泰勒虫病的诊断和流行病学调查。

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【部分图文】：

图5套式PCR敏感性

图4普通PCR敏感性2.6临床样本检测

图1血液涂片吉姆萨染色镜检结果(1000×)

绵羊血涂片染色后,在显微镜下发现梨籽形和点状羊泰勒虫虫体,见图1。2.2PCR扩增

图2套式PCR扩增结果

DNA经外引物PCR扩出约为852bp目的条带,退火温度为55℃;经内引物PCR扩出约为492bp目的条带,最佳退火温度为58℃(见图2)。2.3目的基因序列测定

图3特异性PCR扩增

该方法可特异性检测出羊泰勒虫基因组DNA,而以羊巴贝斯虫、弓形虫和绵羊无浆体的DNA为模板时未能扩增出相应基因片断(图3),具有较好的特异性。2.5敏感性试验

本文编号：3892090