高效制备霍乱弧菌菌影及其增强猪瘟疫苗免疫效果的研究

发布时间：2024-02-19 16:21

　　为评价霍乱弧菌菌影(VCG)对猪瘟活疫苗及猪瘟病毒E2蛋白抗原区(BC和AD区)亚单位疫苗免疫增强效果的作用,本实验首先利用含有裂解质粒的霍乱弧菌制备VCG,通过对细菌裂解前后进行平板计数及透射电镜检测VCG裂解效果,结果显示所制备的VCG裂解率高,且基本形成一个完整的细菌空壳。在确定最佳猪瘟活疫苗使用量后探究VCG对猪瘟活疫苗(CFS ST)免疫效果的影响,实验分别用VCG+CFS ST和CFS ST免疫家兔一次,设置对照组,并在免疫第42 d后攻毒。本研究还探究了VCG作为佐剂对猪瘟E2蛋白主要抗原区蛋白亚单位疫苗免疫效果的影响,实验分别用完全弗氏佐剂(CFA)和VCG联合E2蛋白主要抗原区蛋白,通过间隔两周的方式分4次免疫家兔,设置对照组,并在免疫第56 d后攻毒。通过阻断ELISA方法每周检测家兔血清的抗体阻断率,免疫后以500 RID₅₀的猪瘟病毒弱毒株通过耳缘静脉注射方式对家兔攻毒。结果显示,50 RID₅₀的猪瘟活疫苗组家兔血清抗体阻断率显著降低(p<0.001);VCG+CFS ST组家兔猪瘟抗体阻断率在免疫14 d后大...

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【部分图文】：

图1VCG(A)与霍乱弧菌(B)透射电镜结果

将制备的VCG进行平板活菌计数检测，结果显示，在诱导E基因表达前，活菌数为1.7×107cfu/mL，裂解后活菌数为4×103cfu/mL，根据裂解率计算公式得出细菌裂解率为99.9%。菌影制备成冻干粉后，取约109细胞的菌影量涂板计数发现无活菌生长。透射电镜观察可见，表达E基因....

图2猪瘟活疫苗免疫家兔的猪瘟抗体水平

利用不同剂量猪瘟活疫苗（传代细胞源）免疫家兔，并监测家兔体内猪瘟抗体产生的变化。结果显示，当使用免疫剂量为50RID50的猪瘟活疫苗时，家兔体内CSFV抗体的产生速度相较于其它免疫剂量组显著降低（p<0.001），而当猪瘟活疫苗接种剂量大于200RID50时，相较于免疫剂量较....

图4VCG与E2蛋白亚单位疫苗免疫家兔后的抗体水平

分别用CFA(E2）、VCG(E2）以及等量的PBS免疫家兔，免疫后每周采血检测抗体。结果显示，在二免一周后除对照组外均有特异性抗体产生，且均为上升趋势（p<0.001）。此外，VCG(E2）组阻断率略低于弗氏佐剂乳化E2蛋白主要抗原区组，然而在免疫后第56d后也可达到80%以....

图3VCG与猪瘟活疫苗联合免疫后家兔抗体水平

实验利用含有或不含有VCG的50RID50经典猪瘟活疫苗（CSFST）以及等量的PBS（作为阴性对照）分别免疫家兔一周后，每周采血进行抗体检测。结果显示，VCG+CSFST组家兔产生的抗体阻断率在14d后的大部分时间点显著高于CSFST组（p<0.05）（图3）。表明V....

本文编号：3902985