H9N2亚型禽流感病毒鸭感染模型的建立

发布时间：2024-04-13 17:49

　　近年来,低致病性H9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)对水禽的感染率逐年上升。因而,防控水禽H9N2亚型禽流感显得尤为重要。尽管如此,水禽缺乏有效H9亚型禽流感疫苗,已成为世界性难题。建立水禽的H9N2亚型AIV感染模型,是解决上述问题的前提。 通过鸡胚纯化法,纯化并鉴定3株H9N2亚型AIV。将这3株H9N2亚型AIV和实验室早期已纯化鉴定的2株H9N2亚型AIV,分别通过静脉途径感染5周龄鸭子：以106.0EID50/100μL的剂量,100μL/只,2只/毒株。在感染后第1-5天,采集咽拭子和泄殖腔拭子,并进行病毒分离。结果表明,与其他4株H9N2亚型AIV相比,SH441对鸭的感染率最高,为100%,且在鸭体内具有良好的复制能力；该病毒可在咽拭子中检测到,但无法在泄殖腔拭子中检测到。选用SH441作为攻毒试验的毒株,进一步扩大攻毒试验的动物数量为6只。在感染后第3天,剖杀3只鸭子并取其肺、气管、心、肝、脾、肾、脑、胰等8个组织进行病毒分离。在感染后第1-5天,分别采集所有存活的鸭子咽拭子。结果显示,SH441对5周龄鸭子的感染结果与小规模攻毒...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 禽流感病毒
        1.1.1 禽流感概述
        1.1.2 H9N2亚型禽流感病毒
        1.1.3 禽流感病毒的结构及组成
        1.1.4 禽流感病毒的复制
        1.1.5 禽流感病毒致病力的判定
        1.1.6 禽流感诊断技术
        1.1.7 禽流感的防控
    1.2 疫苗
        1.2.1 疫苗类型
        1.2.2 H9N2亚型禽流感疫苗
    1.3 本研究的目的和意义
2 病毒的纯化、鉴定与扩毒
    2.1 材料与方法
        2.1.1 病毒分离株
        2.1.2 SPF鸡胚
        2.1.3 主要试剂和仪器
        2.1.4 血凝(HA)试验
        2.1.5 病毒纯化
        2.1.6 扩毒实验
        2.1.7 血清学鉴定
        2.1.8 RT-PCR鉴定
        2.1.9 EID₅₀(鸡胚半数致死量)的测定
    2.2 结果与分析
        2.2.1 病毒纯化的结果
        2.2.2 血清学鉴定结果
        2.2.3 RT-PCR鉴定结果
        2.2.4 三株病毒EID₅₀的测定结果
    2.3 讨论
3 H9N2亚型禽流感病毒的水禽感染模型的建立
    3.1 材料与方法
        3.1.1 病毒分离株
        3.1.2 实验动物
        3.1.3 主要仪器及试剂
        3.1.4 鸭攻毒用H9毒株的筛选
        3.1.5 棉拭子的病毒滴度测定
        3.1.6 动物扩大试验
        3.1.7 感染鸭组织的病毒滴定
    3.2 结果与分析
        3.2.1 SH441感染鸭实验结果
        3.2.2 SH1753感染鸭实验结果
        3.2.3 其他3株鸭源H9N2亚型AIV感染鸭实验结果
        3.2.4 攻毒用毒株的筛选结果
        3.2.5 SH441扩大动物数量实验结果
        3.2.6 组织的病毒分离结果
    3.3 讨论
4 H9N2亚型禽流感病毒的水禽感染模型实际应用的效果评估
    4.1 材料与方法
        4.1.1 病毒株和疫苗
        4.1.2 实验动物
        4.1.3 主要仪器及试剂
        4.1.4 SH441灭活苗免疫效果的监测
        4.1.5 血凝抑制(HI)试验
        4.1.6 免疫鸭感染SH441后棉拭子病毒滴度的测定
        4.1.7 免疫鸭感染SH441后肺组织的病毒滴定
        4.1.8 肺组织病理切片的制作
    4.2 结果与分析
        4.2.1 血凝抑制试验测定结果
        4.2.2 免疫鸭感染SH441后棉拭子的病毒分离结果
        4.2.3 肺组织的病毒分离结果
        4.2.4 肺组织的病理切片结果
    4.3 讨论
5 结论
致谢
参考文献
附录
作者简介



本文编号：3953401