Gα12蛋白抑制口蹄疫病毒在PK-15细胞上复制

发布时间：2024-04-24 04:16

　　鸟嘌呤核苷酸结合蛋白Gα12参与多种细胞反应的调节,但是在口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)方面的研究较少。本研究中,用FMDV感染PK-15细胞,发现Gα12的mRNA和蛋白水平都有所上调,预示Gα12可能与FMDV复制存在某种联系,需要进一步研究Gα12蛋白对FMDV在PK-15细胞上复制的影响。为此,在过表达Gα12和干扰Gα12表达的情况下,通过实时荧光定量、Western blot和TCID₅₀检测Gα12对FMDV复制的影响。结果表明,过表达Gα12后,FMDV的mRNA水平、蛋白水平和病毒滴度都有所降低,然而,下调Gα12后,FMDV的复制呈相反的趋势,说明Gα12可以抑制FMDV在PK-15细胞上的复制。本研究首次发现Gα12具有抑制口蹄疫病毒复制的作用,为抗FMDV的研究提供了新思路和理论基础,对FMDV相关研究具有重要意义。

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【部分图文】：

图3FMDV感染上调Gα12

综上所述,FMDV感染后上调Gα12在基因和蛋白水平的表达。2.4过表达Gα12抑制FMDV的复制

图1Gα12真核表达质粒pcDNA3.1-Gα12-myc的构建与鉴定

利用引物对Gα12基因进行扩增后,进行1%琼脂糖凝胶电泳,检测到1023bp扩增条带(图1A),大小与预测相符。将经NheⅠ和BamHⅠ双酶切的片段与pcDNA3.1/myc-His(-)载体连接,转化Trans5α大肠杆菌感受态细胞,提取质粒,进行NheⅠ与BamHⅠ双酶切....

图2pcDNA3.1-Gα12-myc质粒的表达

将pcDNA3.1-Gα12-myc真核表达质粒和pcDNA3.1/myc-His(-)对照质粒分别转染PK-15细胞,36h收取细胞样品,用小鼠抗myc单抗进行Westernblot检测,检测到40ku条带,大小与预测相符合,表明质粒Gα12-myc在PK-15细胞中成功....

图4过表达Gα12抑制口蹄疫病毒复制

为了验证Gα12过表达对FMDV复制的影响,将pcDNA3.1-Gα12-myc真核质粒以不同剂量(0、1和2μg)转染PK-15细胞,转染24h后接FMDV(MOI=0.5),24h后收取细胞样品。如图4A所示,随着Gα12蛋白表达量的升高,FMDV的蛋白量逐渐下降;....

本文编号：3963218