CHO细胞源口蹄疫多表位疫苗的初步研究

发布时间：2024-04-25 20:14

　　中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)作为哺乳动物细胞真核表达系统,不仅能重组蛋白的天然结构,而且最大化保证了重组蛋白的生物学和免疫学功能,已广泛用于生产医用药物、细胞因子和单抗等生物制剂。由于生产成本高,还没有广泛用于生产兽用疫苗抗原及其生物制剂,也没有用于口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)重组抗原的生产。目前口蹄疫(Foot-and-mouth diseas,FMD)重组亚单位疫苗重组抗原的生产大多采用原核表达系统,并不能保证其抗原天然结构和生物学功能。因此,开发可高水平分泌表达具有天然结构的FMDV抗原的基因工程细胞系显得尤为重要,也是未来疫苗研究的发展趋势。为此,本研究以O型FMDV抗原表位为材料,CHO细胞为研究对象,利用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术为手段,构建组成型高水平分泌FMDV抗原的基因工程细胞系,为规模化生产具有天然结构和功能的FMDV重组抗原提供生产用基因工程CHO细胞系。首先,利用信息学技术预测、筛选能提高CHO细胞分泌表达O型FMDV抗原表位(OME1)的信号肽...

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【部分图文】：

图2-1FMDV抗原多表位基因表达盒顺序Fig.2-1FMDVAntigenmultiepitopegeneexpressioncassettesequence

中国农业科学院硕士学位论文第二章增强CHO细胞分泌表达O型FMDV抗原表位重组蛋白的信号肽筛选11了防止两个相邻抗原表位间形成新的抗原表位，在相邻抗原表位之间引入GGSSGG间隔子序列以确保每个抗原表位的独立性。（图2-1为FMDV抗原多表位基因表达盒顺序）。根据CHO细胞密码子....

图2-2基因表达盒顺序Fig.2-2Geneexpressioncassettesequence

中国农业科学院硕士学位论文第二章增强CHO细胞分泌表达O型FMDV抗原表位重组蛋白的信号肽筛选14图2-2基因表达盒顺序Fig.2-2GeneexpressioncassettesequenceRE：抗原多表位基因；KOZAK：KOZAK序列；SignalPeptide：信号肽序....

图2-3O型FMDV抗原表位重组质粒图谱

中国农业科学院硕士学位论文第二章增强CHO细胞分泌表达O型FMDV抗原表位重组蛋白的信号肽筛选17pCI-neo载体双酶切：双酶切反应体系，pCI-neo载体（5ug）10μL，10×Buffer5μL，NotI2μL，XhoI2μL，ddH2O31μL，总体积50μL。双酶切反....

图2-4信号肽切割位点的信息学分析

中国农业科学院硕士学位论文第二章增强CHO细胞分泌表达O型FMDV抗原表位重组蛋白的信号肽筛选21图2-4信号肽切割位点的信息学分析Fig.2-4InformaticsAnalysisofSignalPeptideCuttingSites2O-1：Erythropoietin信号....

本文编号：3964201