牛乳中α-酪蛋白三种ELISA检测方法的研究

发布时间：2024-05-16 21:14

　　α-酪蛋白是牛乳蛋白中含量最高的蛋白，约占牛乳蛋白总量的40%左右，并且，其在牛乳中的含量相对稳定，因此，可以将其含量作为检测牛乳中是否掺入其他蛋白质的检测指标。本研究以两α-酪蛋白标准品：大分子（C-6780）和含有六个氨基酸的寡肽（C-1658）作为研究对象。 以大分子作为免疫原，通过对BALB/C小鼠进行腹腔免疫注射，三免后检测小鼠阳性血清效价，达到细胞融合的要求之后，取出其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合。阳性杂交瘤细胞株的筛选是使用ELISA方法进行检测融合后的细胞的培养基上清液的情况进行的，由此筛选出阳性株，进而通过有限稀释法对其亚克隆，获得一株单克隆抗体细胞株4H3，其能够稳定地分泌抗α-酪蛋白的抗体，并且，经鉴定其抗体亚类为IgG1。通过对小鼠进行体内诱生法获得腹水，使用亲和层析法对其进行纯化。同样以大分子作为免疫原，对新西兰大白兔进行颈背部散点注射和大腿内侧肌肉注射的方法进行免疫，对其进行心脏采血，对全血进行处理后得到抗大分子的多克隆抗体。并鉴定了所获得的单抗和多抗的性质，奠定了建立免疫学检测方法的基础。 由于寡肽属于小分子物质，不能刺激机体产生抗体，因此，通过戊二...

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1检测免疫小鼠的血清效价Fig.1.1Titeroftheimmunizedmice

本试验采用常规免疫，在三免后的第7天，对小鼠进行断尾采血，通过ELISA方法对其效价进行分析。同时，采取未免疫的小鼠血清作为阴性对照。由试验结果可知，两只小鼠的阳性血清效价均可达到1:32000，达到细胞融合的要求，均可用于细胞融合。在融合前三天进行加强免疫。

图1.2腹水纯化结果-亲和层析法Fig.1.2Affinitychromatographyofpurifiedascites

图1.2腹水纯化结果-亲和层析法Fig.1.2Affinitychromatographyofpurifiedascites化后腹水效价的测定ELISA检测后，根据（待测孔D492nm值/对应阴性孔D492nm值）≥2时，数为其效价可知，本试验所得单....

图1.3纯化后单抗效价的测定Fig1.3Thetiterofpurifiedascites

图1.2腹水纯化结果-亲和层析法Fig.1.2Affinitychromatographyofpurifiedascites.2.4纯化后腹水效价的测定经过ELISA检测后，根据（待测孔D492nm值/对应阴性孔D492nm值）≥2时，单抗的最稀释....

图1.4纯化后抗体的SDS-PAGE结果

M：Marker；1：纯化后腹水；2：未纯化腹水图1.4纯化后抗体的SDS-PAGE结果M：Marker；1：purifiedascites；2：ascites；Fig.1.4TheSDS-PAGEgelselectrophoresisofascite亚....

本文编号：3974919