鹅T细胞表面分子CD8α的分子克隆及其免疫学活性研究
发布时间：2024-05-18 01:08
CD8是一种淋巴细胞表面糖蛋白,主要参与并介导细胞免疫应答。本研究首次克隆并报道了鹅CD8 α的全部cDNA芋列,鹅CD8 α由1459 bp碱基构成,包含711bp的编码区。对序列进行生物信息学分析的结果显示：CD8 α在禽类中较保守,尤其是鹅与番鸭、麻鸭的碱基相似度达90%以上,氨基酸相似度约为80%。根据CD8 α氨基酸序列构建分子进化树的结果也证实,鹅CD8 α与番鸭、麻鸭一起构成区别于鸡的单独分支。我们用半定量RT-PCR检测了CD8 α在雏鹅组织分布情况。同时,选用B-actin作为内参基因进行校正检测。结果显示：CD8 α在免疫相关组织(包括胸腺、脾脏和法氏囊)和粘膜相关组织(比如皮肤)的转录量相对最高；此外,CD8 α在脑组织中转录量也较高。对比雏鹅与成年鹅免疫相关组织CD8 α转录水平的结果显示：CD8 α在雏鹅与成年鹅的胸腺与脾脏转录量均相对最高；雏鹅法氏囊组织中CD8 α的转录量远远高于成年鹅法氏囊组织中CD8 α的转录量；而在小肠与盲肠中,雏鹅中CD8 α的转录量低于成年鹅中CD8 α的转录量。此研究为揭示免疫器官的发育有重要参考价值。应用半定量RT-PCR方法...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
1 CD8分子的结构与功能
2 脊椎动物CD8分子的研究进展
2.1 CD8分子在哺乳类动物中的研究进展
2.2 CD8分子在禽类中的研究进展
3 本实验的研究目的及意义
第二章 鹅CD8 α基因的分子克隆
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 菌种和质粒
1.3 主要实验仪器和设备
1.4 实验试剂
1.5 相关溶液配制
2 实验方法与操作
2.1 鹅CD8 α部分cDNA片段的扩增
2.2 目的基因片断的克隆与测序
2.3 鹅CD8 α的cDNA全长扩增
2.4 cDNA序列分析
3 实验结果
3.1 鹅CD8α核酸及氨基酸序列分析
3.2 鹅及其他动物的CD8 α氨基酸多序列比对分析
3.3 鹅及其他动物CD8 α氨基酸序列进化树分析
4 讨论
5 本章小结
第三章 鹅CD8 α的组织表达谱及其在鹅体内免疫学活性研究
1 实验材料
1.1 实验动物及病毒株
1.2 实验仪器和设备
1.3 实验试剂
2 实验方法与操作
2.1 正常雏鹅组织的选取与总RNA的提取
2.2 动物病毒模型的建立
2.3 检测组织的选取和总RNA的提取
2.4 反转录合成cDNA第一链
2.5 半定量RT-PCR
3 实验结果
3.1 鹅CD8 α在雏鹅组织表达谱
3.2 鹅CD8 α在成年鹅与雏鹅免疫相关组织表达谱
3.3 雏鹅新型病毒性肠炎病毒对雏鹅免疫器官中CD8 α的表达水平的影响
4 讨论
4.1 CD8 α在雏鹅组织转录情况分析
4.2 CD8 α在成年鹅和雏鹅的免疫器官中的转录水平分析
4.3 CD8 α雏鹅组织免疫学活性分析
5 本章小结
第四章 鹅CD8 α的免疫学活性检测
1 实验材料
1.1 实验动物及其病毒株
1.2 实验仪器和设备
1.3 实验试剂
2 实验方法与操作
2.1 鹅脾脏淋巴细胞免疫学活性的探究
2.1.1 鹅脾脏淋巴细胞的分离
2.1.2 免疫刺激剂处理淋巴细胞
2.1.3 总RNA的提取
2.1.4 反转录合成cDNA第一链
2.1.5 定量RT-PCR
2.2 CD8 α淋巴细胞应对病毒有感染的免疫应答检测
2.2.1 细胞病理模型的建立
2.2.2 免疫荧光方法检测CD8 α的表达量变化
2.3 鹅细胞免疫调节机制的探究
2.3.1 细胞病理模型的建立
2.3.2 收集细胞和RNA的抽提
2.3.3 免疫调节因子转录水平变化的检测
3 实验结果
3.1 体外脾脏淋巴细胞的免疫学活性检测
3.2 脾脏淋巴细胞应对NGVEV的免疫应答检测
3.3 脾脏淋巴细胞对GPV的免疫应答和GPV在淋巴细胞中增殖的检测
4 实验讨论
5 本章小结
参考文献
致谢
作者简介及发表论文情况
本文编号：3976228
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
1 CD8分子的结构与功能
2 脊椎动物CD8分子的研究进展
2.1 CD8分子在哺乳类动物中的研究进展
2.2 CD8分子在禽类中的研究进展
3 本实验的研究目的及意义
第二章 鹅CD8 α基因的分子克隆
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 菌种和质粒
1.3 主要实验仪器和设备
1.4 实验试剂
1.5 相关溶液配制
2 实验方法与操作
2.1 鹅CD8 α部分cDNA片段的扩增
2.2 目的基因片断的克隆与测序
2.3 鹅CD8 α的cDNA全长扩增
2.4 cDNA序列分析
3 实验结果
3.1 鹅CD8α核酸及氨基酸序列分析
3.2 鹅及其他动物的CD8 α氨基酸多序列比对分析
3.3 鹅及其他动物CD8 α氨基酸序列进化树分析
4 讨论
5 本章小结
第三章 鹅CD8 α的组织表达谱及其在鹅体内免疫学活性研究
1 实验材料
1.1 实验动物及病毒株
1.2 实验仪器和设备
1.3 实验试剂
2 实验方法与操作
2.1 正常雏鹅组织的选取与总RNA的提取
2.2 动物病毒模型的建立
2.3 检测组织的选取和总RNA的提取
2.4 反转录合成cDNA第一链
2.5 半定量RT-PCR
3 实验结果
3.1 鹅CD8 α在雏鹅组织表达谱
3.2 鹅CD8 α在成年鹅与雏鹅免疫相关组织表达谱
3.3 雏鹅新型病毒性肠炎病毒对雏鹅免疫器官中CD8 α的表达水平的影响
4 讨论
4.1 CD8 α在雏鹅组织转录情况分析
4.2 CD8 α在成年鹅和雏鹅的免疫器官中的转录水平分析
4.3 CD8 α雏鹅组织免疫学活性分析
5 本章小结
第四章 鹅CD8 α的免疫学活性检测
1 实验材料
1.1 实验动物及其病毒株
1.2 实验仪器和设备
1.3 实验试剂
2 实验方法与操作
2.1 鹅脾脏淋巴细胞免疫学活性的探究
2.1.1 鹅脾脏淋巴细胞的分离
2.1.2 免疫刺激剂处理淋巴细胞
2.1.3 总RNA的提取
2.1.4 反转录合成cDNA第一链
2.1.5 定量RT-PCR
2.2 CD8 α淋巴细胞应对病毒有感染的免疫应答检测
2.2.1 细胞病理模型的建立
2.2.2 免疫荧光方法检测CD8 α的表达量变化
2.3 鹅细胞免疫调节机制的探究
2.3.1 细胞病理模型的建立
2.3.2 收集细胞和RNA的抽提
2.3.3 免疫调节因子转录水平变化的检测
3 实验结果
3.1 体外脾脏淋巴细胞的免疫学活性检测
3.2 脾脏淋巴细胞应对NGVEV的免疫应答检测
3.3 脾脏淋巴细胞对GPV的免疫应答和GPV在淋巴细胞中增殖的检测
4 实验讨论
5 本章小结
参考文献
致谢
作者简介及发表论文情况
本文编号：3976228
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3976228.html
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