绵羊外周血中游离DNA应用于胎儿性别鉴定以及基因分型的初步研究

发布时间：2024-05-22 01:51

　　目的：外周血中游离的DNA主要是指存在于血浆，血清等循环系统里的一些小片段DNA。它是机体代谢的正常生理表现，但是在一些病变或类病变机体中这类游离的DNA的含量和组成会发生变化。这些研究结果在一些疾病的临床诊断以及非创伤性早期妊娠诊断方面给人们提供了一个新的检测诊断方法。本研究应用三种方法从绵羊外周血浆/血清中分离提取游离DNA，建立高效的外周血游离DNA提取方法，并对SRY基因进行PCR扩增开展早期胎儿性别鉴定，同时对利用游离DNA进行基因突变筛选的可行性做初步的研究。 方法：1、绵羊外周血中游离DNA提取及SRY基因检测。利用加热法、酚氯仿法以及试剂盒从500μL血浆/血清中提取游离的DNA。根据游离DNA片段的特点分别设计扩增产物为168bp的MC1R检测引物和178bp的SRY基因引物进行普通PCR检测。 2、不同妊娠时期胎儿性别鉴定。利用试剂盒提取血浆样品中游离DNA，设计巢式PCR引物，优化扩增体系。对SRY基因特异性扩增，并统计各个妊娠阶段的检测结果与分娩结果分析。 3、利用酶切及HRM技术对血浆DNA中绵羊FecB基因进行分型效果研究。 结果：1、利用加热法、酚氯仿法、...

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

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项目资助
摘要
Abstract
英文缩略词表
前言
    1 研究目的和意义
    2 论文的理论依据
    3 论文总体研究思路
        3.1 绵羊外周血中游离 DNA 分离提取方法的建立：
        3.2 利用巢氏 PCR 对游离胎儿 DNA 检测进而开展胎儿性别鉴定：
        3.3 基于 HRM 的外周血游离 DNA 用于基因分型的研究：
第一章 文献综述
    前言
    1 游离胎儿 DNA 的病理、生理学机制
    2 游离胎儿 DNA 的组织来源
        2.1 胎儿造血细胞
        2.2 胎盘
        2.3 胎儿和母体之间 DNA 分子的直接转运
    3 游离胎儿 DNA 的提取分离
        3.1 直接热提取法
        3.2 酚氯仿法
        3.3 商业试剂盒
    4 游离胎儿 DNA 的检测
        4.1 普通 PCR 扩增法
        4.2 巢式 PCR 检测
        4.3 荧光定量 PCR 法
        4.4 引物延伸 PCR 法
        4.5 质谱法(MS)检测
    5 游离胎儿 DNA 的临床应用
        5.1 妊娠胎儿性别鉴定
        5.2 、性别相关遗传疾病的诊断
    6 其他遗传相关疾病的临床诊断
        6.1 、染色体非整倍体疾病的诊断
        6.2 、Rh D 血型检测
    7 基于 HRM 的基因分型技术
    8、存在的问题及研究前景
第二章 试验研究
    试验一 绵羊外周血中游离 DNA 提取及 SRY 基因检测
        引言
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 实验样品采集和制备
                1.1.2 所需设备仪器及试剂
            1.2 方法
                1.2.1 酚氯仿法提取血浆/血清游离 DNA
                1.2.2 加热法提取血浆/血清游离 DNA
                1.2.3 利用试剂盒提取血浆/血清游离 DNA
                1.2.4 PCR 反应
                1.2.5 凝胶电泳分析
        2 实验结果
            2.1 采用不同提取方法检测结果
            2.2 检测不同来源模板扩增的结果
            2.3 SRY 基因的检测
        3 讨论
        4 结论
    试验二 基于巢式 PCR 的游离胎儿 DNA 性别鉴定
        引言
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 实验样品采集和制备
                1.1.2 所需设备仪器及试剂
            1.2 方法
                1.2.1 利用加热法提取血浆游离 DNA
                1.2.2 巢式 PCR 反应及其第二轮反应体系优化
                1.2.3 凝胶电泳分析
                1.2.4 结果判定统计
        2 实验结果
            2.1 巢式 PCR 第二轮扩增体系优化结果
            2.2 血浆样本扩增结果
            2.3 性别判定结果
            2.4 不同妊娠时期鉴定准确率
        3 讨论
        4 结论
    试验三 基于 HRM 的游离 DNA 中 FecB 基因突变筛选的可行性研究
        前言
        1 材料和方法
            1.1 实验材料
            1.2 所需设备仪器及试剂
            1.3 实验方法
                1.3.1 血液基因组的提取
                1.3.2 引物设计合成
                1.3.3 不同引物浓度
                1.3.4 不同 Mg²+浓度
                1.3.5 染料添加量对 HRM 的影响分析
                1.3.6 染料添加方式对 HRM 分析的影响
                1.3.7 HRM 分析
                1.3.8 进行 PCR-RLFP 检测
                1.3.9 基因的克隆测序鉴定
        2 结果
            2.1 不同引物浓度对 HRM 分析的影响
            2.2 不同 Mg2+浓度对 HRM 分析的影响
            2.3 染料浓度梯度结果分析
            2.4 染料添加时间差异结果分析
            2.5 PCR-RLFP 检测结果
            2.6 测序结果
        3 讨论
        4、结论
全文结论及研究特色与创新
参考文献
致谢
作者简介及在学成果
石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表



本文编号：3980222