应用猪口腔液进行PRRSV中和抗体监测及纳米颗粒候选疫苗的评估

发布时间：2024-05-22 05:30

　　猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)自1991年被鉴定以来,已经成为严重危害养猪业的主要疫病,目前在世界范围内每年都给养猪业造成上亿经济损失。口腔液是一种唾液和黏膜渗出液的混合物,包含来自血清和唾液腺的抗体。由于采集简单、费用低廉,用口腔液进行猪场疫病监测得到越来越多的应用。 PRRSV特异性中和抗体在病毒的清除中发挥着重要作用,同时也是评估猪群PRRS免疫保护水平的主要指标。有研究证明可以从猪口腔液样品中检测到PRRSV病原和病毒特异性抗体。但是,迄今为止,应用猪口腔液来检测PRRSV中和抗体仍是空白。因此,本研究旨在建立一种应用猪口腔液进行PRRSV特异性中和抗体检测的试验方法。首先进行标准化试验,口腔液样品主要来自两个方面：猪场免疫PRRSV(?)蜀毒疫苗(PRRSV-MLV)后为期三个月间断性采集的口腔液样品；公猪免疫PRRSV-MLV或感染PRRSV-MN184当天及第21天采集的口腔液和血清样品。试验结果发现当口腔液中PRRSV中和抗体滴度大于1:8时是病毒特异的,而这种特异性中和抗体只有在免疫或者感染28天后才能从口腔液中检测到。为了验证该试验方法,从一个背景未知的猪场,...

【文章页数】：108 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
目录
英文缩写-中文对照表
综述
    1. 猪繁殖与呼吸综合征
        1.1 病原学
        1.2 流行病学
        1.3 致病机理
        1.4 免疫学特性
            1.4.1 体液免疫
            1.4.2 细胞免疫
            1.4.3 细胞因子
        1.5 诊断技术
            1.5.1 病毒分离
            1.5.2 RT-PCR
            1.5.3 血清中和试验
            1.5.4 酶联免疫吸附试验(ELISA)
            1.5.5 间接免疫荧光试验(IFA)
            1.5.6 胶体金免疫检测技术(GIA)
    2. PRRSV的中和抗体
        2.1 中和抗体的作用
        2.2 中和表位的研究进展
        2.3 中和抗体的延迟产生
    3. PRRSV的疫苗研究进展
        3.1 灭活疫苗
        3.2 弱毒疫苗
        3.3 基因工程疫苗
    4. 纳米颗粒疫苗
        4.1 疏水性纳米颗粒
        4.2 亲水性纳米颗粒
    5. 黏膜免疫系统
    6. 疫苗免疫效果评价
    7. 口腔液
本研究的目的意义及立题依据
第一章 建立一种使用猪口腔液检测猪繁殖与呼吸综合征病毒特异性中和抗体的方法
    摘要
    ABSTRACT
    1. 引言
    2. 材料和方法
        2.1 试验材料
            2.1.1 细胞系和病毒毒株
            2.1.2 其它试剂
            2.1.3 标准化样品
            2.1.4 临床样品
        2.2 试验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 病毒增殖
            2.2.3 口腔液和血液的采集
            2.2.4 PRRSV中和抗体的测定
            2.2.5 方法的特异性和敏感性
            2.2.6 重复性
            2.2.7 用ELISA法检测PRRSV特异性和非特异性抗体
            2.2.8 PRRSV RNA拷贝数的检测
            2.2.9 统计分析和数据处理
    3. 结果
        3.1 用猪口腔液测定PRRSV中和抗体滴度的中和试验方法的建立
        3.2 用猪口腔液测定PRRSV中和抗体滴度中和试验方法的验证
        3.3 仔猪口腔液中母源PRRSV中和抗体的检测
        3.4 应用口腔液样品检测中和抗体方法的特异性和敏感性判定
        3.5 重复性
    4. 讨论
    5. 小结
第二章 应用猪口腔液评估灭活PRRSV纳米颗粒疫苗与不同佐剂联合使用的交叉保护免疫效果
    摘要
    ABSTRACT
    1. 引言
    2. 材料和方法
        2.1 试验材料
            2.1.1 细胞系和病毒毒株
            2.1.2 其它试剂
            2.1.3 试验动物
        2.2 试验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 病毒增殖与纯化
            2.2.3 病毒的灭活
            2.2.4 PLGA纳米颗粒疫苗的制备
            2.2.5 测定纳米颗粒包埋PRRSV蛋白的效率
            2.2.6 动物试验
            2.2.7 口腔液和血液的采集
            2.2.8 黏膜相关组织(Lung,TBLN,BALfluid)样品的采集
            2.2.9 试验样品病毒滴度和中和抗体效价的测定
            2.2.10 Real-time PCR检测PRRSV RNA拷贝数
            2.2.11 PRRSV特异性IgA和IgG抗体分析
            2.2.12 统计分析
    3. 结果
        3.1 PRRSV纳米颗粒疫苗特征
        3.2 临床症状及体温和生长参数
        3.3 黏膜相关组织的检测情况
            3.3.1 PRRSV病原检测情况
            3.3.2 黏膜相关组织的PRRSV中和抗体检测
            3.3.3 黏膜相关组织的特异性免疫球蛋白检测
        3.4 血清样品检测
            3.4.1 血清中的病毒量
            3.4.2 血清中的体液免疫应答
        3.5 口腔液样品检测
            3.5.1 猪口腔液中PRRSV病原检测情况
            3.5.2 猪口腔液样品的PRRSV中和抗体水平
            3.5.3 猪口腔液样品中的PRRSV特异性IgA和IgG抗体水平
    4. 讨论
    5. 小结
结论
创新点
后续研究展望
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文情况



本文编号：3980463