新城疫病毒JL02/2000株全基因组克隆与反向遗传辅助系统的构建

发布时间：2024-06-06 03:40

　　新城疫(ND)是一种高致病的禽类恶性传染病。由于其高发病率和高死亡率对社会生产造成巨大经济损失。而近些年,随着反向遗传学操作系统的发展,其为系统的操作和研究RNA病毒提供了操作平台,该方法可以重新设计和优化病毒的基因组,还可以研发新的突变体和重组病毒疫苗。NDV的反向遗传操作平台为研究其生物学特点具有重大意义,而其复制必须同时共转染多个辅助质粒,并在T7 RNA聚合酶调控下转录、翻译后形成RNP核糖核蛋白复合体,包裹病毒全基因组,从而开始病毒复制程序。本实验以BL-21大肠杆菌为模板应用PT-PCR方法获得T7基因,之后通过分子生物学方法构建了稳定表达T7 RNA聚合酶的重组痘苗病毒,用于提供T7 RNA聚合酶;构建了辅助质粒pCI-L、pCI-NP和pCI-P三个辅助质粒形成RNP复合体;应用SOE-PCR(重叠延伸PCR)方法基础上构建了4961bp的基因组起始基因片段ND1,由于ND1片段较大,所以自制T载体pCI-T,成功克隆了ND1片段;构建了转移质粒pBSK-0-1-2-3以及真核表达质粒pBR322-ND5。完成了新城疫JL02/2000株反向遗传辅助系统的建立以及基因组...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

P基因PCR扩增产物.1.1ThePCRamplificationsofgeneofNPandP.1.NP2.DL2000maker3.P图1.2NP，P基因酶切结果Fig.1.2TheenzymeresultsofgenofNP....

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、P、L1和L2基因PCR扩增结果见图1.1、图1.3和图1.4。辅助质粒图1.3L1基因PCR扩增产物Fig.1.3ThePCRamplificationsofgeneofL1.1.λ-EcoT14IdigestDNAmaker2....

、P、L1和L2基因PCR扩增结果见图1.1、图1.3和图1.4。辅助质粒图1.3L1基因PCR扩增产物Fig.1.3ThePCRamplificationsofgeneofL1.1.λ-EcoT14IdigestDNAmaker2....

本文编号：3990252