鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白的真核表达及免疫原性分析

发布时间：2024-06-06 06:27

　　为真核表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的S1蛋白并鉴定其免疫原性,构建了IBV广西优势血清型代表株GX-YL5 S1蛋白基因的重组表达载体pFastBac^TM/HBM-TOPO-S1,转化DH10Bac细胞进而拯救出重组杆状病毒;经间接免疫荧光(IFA)和Western blot鉴定并大量表达;纯化后免疫新西兰大白兔制备兔抗血清,应用IFA和Western blot对该重组蛋白的反应原性进行鉴定,并应用气管环(TOC)中和试验分析其免疫原性。IFA显示重组杆状病毒感染后72 h细胞出现特异性荧光;Western blot显示重组蛋白与抗His标签单克隆抗体以及IBV特异性抗体均能结合,且反应性良好,特异性强;中和试验显示制备的血清对IBV的中和滴度为1∶512。表明该重组S1蛋白具有较好的免疫原性,为IBV S1蛋白的生物学功能、基因工程亚单位疫苗等研究奠定了基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 载体、细胞、毒株和实验动物
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计
        1.2.2 S1基因的克隆及重组表达载体的构建
        1.2.3 重组杆状病毒的产生
        1.2.4 重组蛋白的IFA鉴定
        1.2.5 重组蛋白的Western blot鉴定
        1.2.6 重组S1蛋白的大量表达及纯化
        1.2.7 重组S1蛋白免疫动物
        1.2.8 IFA验证多抗血清与重组蛋白的反应性
        1.2.9 Western blot验证多抗血清与重组蛋白的反应性
        1.2.10 多抗血清的中和试验
2 结果
    2.1 S1基因的RT-PCR鉴定
    2.2 重组表达载体的鉴定
    2.3 重组杆粒的PCR鉴定
    2.4 重组蛋白的IFA鉴定
    2.5 重组蛋白的Western blot鉴定
    2.6 重组S1蛋白的纯化结果
    2.7 多抗血清的IFA鉴定
    2.8 多抗血清的Western blot鉴定
    2.9 中和试验结果
3 讨论



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