免疫磁珠法纯化小鼠精原干细胞效果的研究

发布时间：2024-06-28 02:34

　　精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养体系是精子发生机理研究的基础,也为转基因新技术研发和优良家畜保种提供了新途径,目前小鼠SSCs体外培养体系较为成熟,但是,大动物培养体系尚在探索中。分析表明,机械分离结合酶消化、流式细胞分选及免疫磁珠分选法正在成为SSCs分离纯化的主要方法；作为培养体系重要成分,血清和饲养层促进了SSCs的自我更新和增殖。胶质细胞源性神经营养因子(glial cell Line-derived neurotrophic factor, GDNE)在睾丸支持细胞(Sertoli cells, SCs)和SSCs之间扮演重要的角色。SCs分泌的GDNF可促进SSCs的自我更新和增殖,并抑制其分化,但随后SSCs会由于SCs的过度生长而消亡,SCs的快速生长与SSCs自我更新和增殖间的矛盾关系表明,SSCs的纯化是建立其长期培养体系的关键。为摸索出一种高效SSCs纯化方法,本文采用免疫磁珠分选法,使用干细胞抗体CD90.2进行小鼠SSCs的纯化富集。并采用流式细胞分析法和定量PCR验证了磁珠分选效率。流式细胞分析结果：免疫磁珠...

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【部分图文】：

图2.1:小鼠睾丸内生殖细胞系及其对应出现的时期(ARBellveetal.,1977；Dymetal.,2009)

开始减数分裂，出现初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞，导致SSCs比例占睾丸总细胞的比例下降（ARBellveetal.1977)。因此，6d左右的小鼠睾丸中干细胞比例最多（见图2.1)。另外，对于猪睾丸性原细胞分离的研究表明，酶消化法与机械法相结合比单纯的机械法得到的....

图2.2:自制口吸管

此时，如果不及时将克隆团吸出，SSCs会被迅速生长的支持细胞所淹没。(1) 将培养皿移至倒置显微镜下，在200X镜下，使用自制口吸管（如图2.2)将SSCs克隆团吸出，为避免操作过程中造成污染，可在培养皿中滴加甘油与外界空气隔绝；(2) 吸出的细胞经离心后使用CI-MEM完全培....

图2.3:免疫磁珠分选细胞流程图

图2.3:免疫磁珠分选细胞流程图Fig2.3：TheflowchartofMACS果

图2.5:MEF细胞培养及丝裂霄素处理效果（200x)

■a图2.5:MEF细胞培养及丝裂霄素处理效果（200x)注：A:F0MEF,B：F1MEF,C：F3MEF,D：丝裂霄素C处理后的细胞Fig2.5：TheresultofMEFcultureedandtreatedbyMMC(200x)N....

本文编号：3996310