外被体蛋白Ⅱ对猪瘟病毒复制的影响

发布时间：2024-07-02 01:45

　　内质网蛋白的输出是由外被体蛋白Ⅱ(coat protein complexⅡ,COPⅡ)包被的囊泡介导的,前期研究发现敲低COPⅡ运输途径的调控蛋白Rab1,猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的复制受到显著的抑制,说明Rab1及其调控的运输途径在CSFV的复制过程中有重要作用。为了进一步了解COPⅡ运输途径对CSFV复制的影响,探究COPⅡ蛋白转运过程在CSFV复制中的作用,本研究利用COPⅡ途径的抑制剂H89处理宿主细胞,在不同的时间点检测CSFV RNA、E2蛋白以及病毒感染力的变化。过表达和干扰COPⅡ复合体中的蛋白Sar1b、Sec13和Sec23,并构建相应的稳转细胞系,进一步检测COPⅡ运输途径对猪瘟病毒复制的影响并确定影响的关键蛋白,同时利用重叠延伸PCR构建关键蛋白Sar1b的激活性突变体和失活性突变体,进一步研究Sar1b对CSFV复制的影响,获得以下研究结果:(1)COPⅡ蛋白Sar1b、Sec13和Sec23促进CSFV的复制过程。成功构建Sar1b、Sec13和Sec23基因的过表达细胞系,CSFV接种过表达细胞系,发现...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-4重组质粒pCDH-Sar1b、pCDH-Sec13和pCDH-Sec23转染PK-15细胞后的荧光检测Fig.2-4FluorescencedetectionofPK-15cellstransfectedwithrecombinantplasmidspCDH-Sar1b,pCDH-Sec13andpCDH-Sec23

外被体蛋白Ⅱ对猪瘟病毒复制的影响都有单一特异的FLAG条带（图2-5D、F）；Sar1b蛋白特异性抗体检测显示过表达中的蛋白表达量显著高于对照细胞中的蛋白表达量（图2-5B）。说明PK-Sar1bK-Sec13和PK-Sec23稳定表达的细胞系构建成功，可以用于....

图2-6CSFV在PK-Sar1b细胞系中复制检测

外被体蛋白Ⅱ对猪瘟病毒复制的影响白表达量在24h和48h均显著上升（P<0.05）（图2-7）；PK-Sec23细胞接种CSF在感染早期CSFV的相对RNA复制量上升显著（P<0.05或P<0.01），但36h和变化不显著（P>0.05），E....

图2-7CSFV在PK-Sec13细胞系中复制检测Fig.2-7DetectionofCSFVreplicationinPK-Sec13cellline

A.real-timePCR检测CSFV在PK-Sec13细胞系中的RNA相对表达量；B.Westernblot检测PK-Sec13细胞系中的E2蛋白表达量；C.B中条带的灰度分析A.real-timePCRdetectionofthe....

图2-8CSFV在PK-Sec23细胞系中复制检测Fig.2-8DetectionofCSFVreplicationinPK-Sec23cellline

A.real-timePCR检测CSFV在PK-Sec23细胞系中的RNA相对表达量；B.Westernblot检测PK-Sec23细胞系中的E2蛋白表达量；C.B中条带的灰度分析A.real-timePCRdetectionofthe....

本文编号：3999505