A型口蹄疫抗体固相竞争ELISA检测方法的建立

发布时间：2024-11-02 02:31

　　 为评价A型口蹄疫疫苗免疫水平,本研究以本实验室前期制备的口蹄疫病毒(FMDV)的单克隆抗体(MAb)3D9为捕获抗体,以HRP标记的MAb 9A9作为检测抗体,建立了基于MAb的检测A型FMDV抗体的固相竞争ELISA(SPCE)方法,并对其条件进行优化。结果显示,MAb 3D9的包被浓度为1.16μg/mL,A型FMDV抗原的最佳稀释度为1:5,HRP标记的MAb 9A9的最佳稀释度为1:5 000,当血清132稀释时,检测的临界值确定为35%。利用该方法分别检测A型、O型口蹄疫抗体阳性标准血清以及牛冠状病毒、牛轮状病毒以及猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒的标准阳性血清。结果显示,除A型口蹄疫阳性标准血清为阳性结果外其余均为阴性结果,未出现交叉反应,表明本研究建立的方法特异性强。该方法对经病毒中和试验(VNT)检测为阳性的3份血清进行敏感性试验,敏感性分别为1:1 024、1:256、1:128,均高于VNT,表明其敏感性较高;重复性试验结果显示,该方法批内和批间重复试验的变异系数均小于10%,表明其重复性较好。利用该方法与液相阻断ELISA方法(LPBE)和VNT对...

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【部分图文】：

取3份经VNT检测为阳性的血清样品2倍倍比稀释后，经本研究建立的SPCE方法检测，评估该方法的敏感性，结果显示，ELISA检测血清样品的OD450nm值随着阳性血清稀释倍数增加，其OD450nm值平缓递减，且与VNT测定的效价呈正相关。当样品1稀释至1:1024时，计算得到的P....

图1阴性血清和阳性血清的PI值分布图2.5SPCE的重复性试验结果

本文编号：4008881