腈水合酶/酰胺酶体系制备蛋氨酸羟基类似物

发布时间：2024-11-02 09:21

　　 西洼湖戈登氏菌CGMCC 4.218 4含有一个高效的腈水合酶/酰胺酶体系。本文利用该菌株全细胞中的腈水合酶(Nitrile hydratas)催化2-羟基-4-甲硫基丁腈(HMTBN)水合为2-羟基-4-甲硫基丁酰胺(HMTBAm),利用酰胺酶(Amidase)以原位串联的方式将2-羟基-4-甲硫基丁酰胺水解为2-羟基-4-甲硫基丁酸(HMTBA,蛋氨酸羟基类似物)。考察了底物浓度、细胞质量浓度、温度、pH、反应时间对腈水合酶和酰胺酶活性的影响,对腈水合酶、酰胺酶的热稳定性和pH稳定性进行了测定。结果表明,最优的反应条件为:50 mmol/L HMTBN,3 g/L干重细胞,温度30℃,pH=8.0,反应时间30 min。在最优反应条件下,采用分批补料策略,细胞可使用23批次,HMTBA的累积量在44 h内达到164 g/L,其产率为95%。

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【文章目录】：
1实验部分
    1.1实验材料
    1.2实验方法
        1.2.1培养基
        1.2.2培养条件
        1.2.3腈水合酶活性测定
        1.2.4酰胺酶活性测定
        1.2.5分析方法
2结果与讨论
    2.1反应条件优化
        2.1.1底物浓度对腈水合酶和酰胺酶活性的影响
        2.1.2细胞质量浓度对腈水合酶和酰胺酶活性影响
        2.1.3温度对腈水合酶和酰胺酶活性的影响
        2.1.4腈水合酶和酰胺酶的热稳定性
        2.1.5 p H对腈水合酶和酰胺酶活性的影响
        2.1.6腈水合酶和酰胺酶的p H稳定性
        2.1.7反应时间的影响
    2.2分批补料制备HMTBA
3结论



本文编号：4009371