发情期大熊猫阴道真菌的分离鉴定及所含酵母菌的药敏分析

发布时间：2024-12-10 02:24

　　目的：大熊猫源于中国,是世界上最稀有和受到最大生存威胁的哺乳动物之一。随着人类生存地域的扩张,大熊猫的栖息地环境被破坏,对大熊猫圈养成为保护大熊猫和提高其繁殖率的必要措施。微生物是许多直接或间接影响动物繁殖及相关疾病的原因。真菌作为阴道中微生物的重要组成,时常引发如念珠菌性阴道炎等疾病,也引起动物流产、死胎等繁殖障碍。阴道内真菌存在状况越来越引起人们的关注和研究。为了科学保护大熊猫,提高大熊猫的繁殖率,弄清发情期大熊猫阴道内可培养真菌的种类及对药物的敏感性,为大熊猫的生殖道合理用药提供参考。方法：通过对成都大熊猫繁育研究基地的10只发情期雌性大熊猫(成绩、北川、蜀兰、庆贺、娅仔、晶晶、大娇、萌萌、娅双、小丫头)阴道分泌物进行真菌分离培养、形态学鉴定；通过真菌ITS序列通用引物ITS1、ITS4对分离真菌进行PCR扩增、序列测定,再在NCBI BLAST比对其ITS序列基因相似性,提交其序列。并对各真菌进行分析,找出对大熊猫阴道健康或生殖有威胁菌种。选取5种抗真菌药(两性霉素B、制霉菌素、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑)通过丹麦Rosco纸片扩散法对大熊猫发情期阴道分泌物中分离到的5种酵母菌：链...

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩写词表
第一章 文献综述
    1. 真菌的概况
        1.1 真菌的定义
        1.2 真菌的分类学地位
        1.3 真菌的分类
            1.3.1 按形态学
            1.3.2 按可培养性
            1.3.3 按作用性
        1.4 真菌的鉴定方法
            1.4.1 传统方法
                1.4.1.1 形态学鉴定法
                1.4.1.2 显色培养基培养法
            1.4.2 分子生物学方法
                1.4.2.1 真菌DNA中DNA(G+C)mol%含量测定技术
                1.4.2.2 DNA分子杂交技术
                1.4.2.3 核糖体脱氧核糖核酸(rDNA)序列测定
                1.4.2.4 限制性片段多态性(RFLP)分析技术
                1.4.2.5 随机扩增多态性(RAPD)分析技术
                1.4.2.6 扩增片段长度多态性(AFLP)分析技术
            1.4.3 其他方法
        1.5 真菌对动物的危害性
    2. 人阴道真菌的研究概况
    3. 动物真菌的研究概况
    4. 大熊猫源真菌研究概况
    5. 真菌的耐药性
    6. 结语
第二章 发情期大熊猫阴道可培养真菌的分离鉴定
    1. 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.2 主要仪器
            1.1.3 主要试剂
            1.1.4 主要溶液的配制
            1.1.5 PCR引物
        1.2 方法
            1.2.1 采样
            1.2.2 真菌的分离培养
            1.2.3 真菌的形态学鉴定
                1.2.3.1 菌落形态学观察
                1.2.3.2 显微镜观察
            1.2.4 真菌的rDNA序列分析
                1.2.4.1 真菌总DNA的提取
                1.2.4.2 PCR反应
                1.2.4.3 电泳
            1.2.5 测序鉴定
    2 试验结果
        2.1 真菌的形态学
            2.1.1 互隔交链孢霉(Alternaria alternata)
            2.1.2 甘蔗节菱孢菌(Arthrinium sacchari)
            2.1.3 杂色曲霉(Aspergillus versicolor)
            2.1.4 菌核曲霉(Aspergillus sclerotiorum)
            2.1.5 子囊菌属(Ascomycota sp.LCC38)
            2.1.6 黑曲霉(Aspergillus niger)
            2.1.7 出芽短梗霉菌(Aureobasidium pullulans)
            2.1.8 灰葡萄孢霉(Booyotinia fuckeliana)
            2.1.9 淡色生赤壳菌(Bionectria ochroleuca)
            2.1.10 烟管菌(Bjerkandera adusta)
            2.1.11 球毛壳菌(Chaetomium globosum)
            2.1.12 枝孢样枝孢霉(Cladosporium cladosporioides)
            2.1.13 茎溃疡病菌(Diaporthe melonis)
            2.1.14 黑附球菌(Epicoccum nigrum)
            2.1.15 层生镰刀菌(Fusarium proliferatum)
            2.1.16 马尔尼菲青霉菌(Penicillium marneffe)
            2.1.17 粉质拟青霉(Paecilomyces farinosus)
            2.1.18 指状青霉(Penicillium digitatum)
            2.1.19 假小尾孢霉(Pseudocercosporella fraxini)
            2.1.20 韦斯特拟盘多毛孢(Pestalotiopsis vismiae)
            2.1.21 白腐真菌(Phanerochaete sordid)
            2.1.22 黄瓜萎蔫病菌(Plectosphaerella cucumerina)
            2.1.23 水稻纹枯病菌(Thanatephorus cucumeris)
            2.1.24 粪壳菌属(Sordariomycetes sp.LCC10)
            2.1.25 炭角菌属(Xylariaceae sp.LCC28)
            2.1.26 链状假丝酵母(Candida catenulata)
            2.1.27 汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)
            2.1.28 担子菌类酵母菌(Pseudozyma aphidis)
            2.1.29 季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)
            2.1.30 皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)
        2.2 电泳结果
        2.3 真菌鉴定结果
        2.4 大熊猫生殖情况
    3 讨论
        3.1 真菌组成宏观分析
        3.2 鉴定方法的优缺点
        3.3 样品出现频率最高真菌
        3.4 各大熊猫阴道真菌种分析
        3.5 阴道真菌结合大熊猫生殖情况分析
第三章 发情期大熊猫阴道酵母菌的药敏分析
    1 材料
        1.1 试验菌种
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2 方法
        2.1 培养基
        2.2 接种菌液的配制
        2.3 药敏试验
    3 结果
        3.1 药敏试验图片
            3.1.1 链状假丝酵母(Candida catenulata)
            3.1.2 皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)
            3.1.3 担子菌类酵母菌(Pseudozyma aphidis)
            3.1.4 汉氏德巴利氏酵母(Debaryomyces hansenii)
            3.1.5 季也蒙毕赤氏酵母(Pichia guilliermondii)
        3.2 抑菌圈直径测量结果
    4 讨论
结论
参考文献
致谢
附录



本文编号：4015456