猪圆环病毒2b型表位嵌合病毒样颗粒在E.coli中的制备及鉴定

发布时间：2024-12-21 21:15

　　 为了研究一种更为高效、廉价的猪圆环病毒2型（PCV2）亚单位疫苗,针对PCV2b型Cap基因核酸序列进行优化,将其编码中和表位²²⁶LKDPPLNP²³³的基因序列连接于Cap基因C端（Capc）,并插入PE-Sumo载体,借助大肠杆菌表达系统对Capc蛋白进行表达;利用SDS-PAGE、Western blot、动态光散射和透射电镜观察等手段,对纯化后的目的蛋白活性及其形成的结构进行初步鉴定。结果显示,嵌合Capc基因片段成功插入PE-Sumo载体,并转化到大肠杆菌BL21（DE3）中; Sumo-Capc重组蛋白在26℃下诱导12 h能够以可溶形式大量表达;经纯化的Capc蛋白能够与PCV2单克隆抗体特异结合,并能够自组装形成直径约为18 nm的病毒样颗粒。综上,成功构建了能够表达PCV2b型中和表位嵌合Cap的大肠杆菌表达系统,纯化得到的Capc蛋白具有良好的免疫反应性,且能够自组装成病毒样颗粒。

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 载体、菌种及主要试剂
    1.2 重组表达质粒的制备和重组表达菌体的构建
    1.3 重组蛋白表达条件的优化和可溶性分析
    1.4 重组蛋白的纯化及免疫反应性鉴定
    1.5 PCV2 VLP动态光散射鉴定及电镜观察
2 结果与分析
    2.1 重组表达载体PE-Sumo-Capc构建及鉴定
    2.2 重组Sumo-Capc蛋白表达条件的优化和可溶性分析
    2.3 重组Sumo-Capc蛋白的纯化、酶切和Western blot鉴定
    2.4 PCV2病毒样颗粒物理特性鉴定
3 结论与讨论



本文编号：4018918