流行性出血病病毒血清分型RT-PCR方法的建立及应用

发布时间：2024-12-26 02:25

　　 以决定流行性出血病病毒(EHDV)血清型的第二基因节段(Seg-2)为检测靶基因,设计7对特异性引物,建立用于鉴定EHDV血清型的RT-PCR检测方法,并通过对扩增产物的测序,进一步了解病毒Seg-2的遗传特性。特异性试验结果显示,该检测方法可准确鉴定不同血清型的EHDV毒株,与蓝舌病病毒、中山病病毒、阿卡斑病毒均无交叉反应;灵敏度试验结果显示,对不同血清型EHDV核酸的检测下限均可达10～2拷贝;对我国不同时间与不同地域分离的EHDV毒株进行血清型RT-PCR鉴定,结果显示分离的31株EHDV分属EHDV-1、-5、-6、-7与-10型等5种血清型,与血清中和试验的鉴定结果完全吻合。以上结果表明,该方法具有良好的特异性和较高的灵敏度,可快速准确地鉴定EHDV毒株的血清型。

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

图1 不同血清型EHDV PCR检测结果

取不同血清型EHDV代表毒株(EHDV-1、-2、-5、-6、-7、-8和-10血清型毒株)cDNA为模板,用对应的血清型特异性引物进行PCR扩增,同时每种血清型均设立阴性对照。结果显示7种血清型EHDVSeg-2的扩增产物大小在800～1200bp,每种血清型阴性对照(N....

图2 EHDV血清型引物特异性检测

以BTV、AKAV、CHUV和7种血清型EHDV(EHDV-1、-2、-5、-6、-7、-8和-10)的cDNA为模板,分别使用表2中不同血清型EHDV鉴定引物(P1～P10)进行PCR扩增,均设立阴性对照,分析引物的特异性。结果显示:EHDV血清型RT-PCR引物仅与对应血清型....

图3 EHDV血清型引物灵敏度检测

通过绝对定量qPCR计算出EHDV-1、EHDV-2、EHDV-5、EHDV-6、EHDV-7、EHDV-8和EHDV-10不同血清型EHDV代表毒株的cDNA拷贝数分别为1.1×109、1.4×1010、1.2×1011、3.6×1010、2.4×1010、8.7×108和2.....

图4 基于NJ法的EHDV 参考毒株和中国毒株Seg-2序列的系统发育分析

目前血清中和试验是国际上血清检测的金标准,但该方法有操作要求高、检测时间长和必须获得血清型完整的标准毒株或血清等缺点,不利于EHDV血清型的快速鉴定。而病毒核酸的分子检测具有操作简便、检测样本量多、准确和快速等优点,已被广泛应用于各类疾病的快速诊断及血清型鉴定等方面。本研究以我国....

本文编号：4020382