IBRV特异性噬菌体单域抗体库的构建、筛选及鉴定

发布时间：2025-01-17 15:08

　　 为了开发有效的用于治疗和诊断牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis,IBR)的抗体,试验用牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)免疫双峰驼,构建IBRV特异性噬菌体单域抗体库,并以IBRV gD蛋白为筛选抗原,对其进行筛选,对筛选得到的单域抗体进行诱导表达、纯化及鉴定。结果表明:构建得到的IBRV特异性噬菌体单域抗体库的库容为7×10～7;经3轮富集和筛选,phage-ELISA筛选出14个与gD蛋白结合的阳性克隆,并成功对阳性值较高的重组单域抗体IB68进行表达和纯化;经ELISA和Western-blot鉴定,重组单域抗体IB68可与gD蛋白产生抗原抗体结合反应,具有较高的亲和力。说明制备的IBRV特异性噬菌体单域抗体库具有较高的库容和多样性,且筛选得到的单域抗体具有较高的抗原抗体结合活性和免疫学反应性。

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【部分图文】：

图1 IBRV gD基因 PCR扩增结果

对PCR扩增出的gD基因进行电泳检测,得到的目的条带大小为1113bp(见图1),与预期大小一致;将gD基因与pET-28a质粒连接并转化至E.coliTransetta(DE3)感受态细胞中,诱导表达后通过SDS-PAGE凝胶检测,结果gD蛋白以包涵体形式高效表达,对其....

图2 IBRV gD蛋白诱导表达和纯化结果

图1IBRVgD基因PCR扩增结果3.2IBRV特异性噬菌体单域抗体库的构建

图3 双峰驼血清抗体效价的检测结果

以IBRV包被酶标板,对免疫后的骆驼血清倍比稀释,并以基础血清为阴性对照,采用ELISA法测定血清抗体效价,结果双峰驼血清抗IBRV抗体效价达到1∶4096,见图3。3.2.2VHH基因PCR扩增

图4 VHH PCR扩增结果

3.3IBRV特异性单域抗体的富集与筛选图5抗体库转化效率检测结果

本文编号：4028226