BHK-21细胞无血清悬浮培养生产新城疫病毒

发布时间：2025-02-07 18:25

　　新城疫(Newcastle disease,ND)因其高发病率和高死亡率给世界各地的家禽养殖业造成了巨大威胁,接种疫苗是防控ND最有效的措施。采用传统的鸡胚工艺生产新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)疫苗,存在SPF鸡胚供应不足、质量控制困难及规模放大受限等问题;基于细胞的贴壁培养工艺存在成本高、操作复杂和过程控制困难等缺点;而应用无血清悬浮培养工艺虽可克服上述缺陷,但存在缺乏对NDV敏感的悬浮细胞系、适于NDV扩增的无血清维持培养基及工艺不成熟等问题。针对上述问题,亟需开发基于动物细胞的NDV悬浮培养工艺及适于NDV增殖的无血清维持培养基。本文首先以实验室自主研发的无血清培养基SF201为生长及维持培养基,通过敏感细胞株筛选、病毒适应及细胞毒种制备、病毒接种条件优化,建立了无血清悬浮培养生产NDV工艺。当BHK-v002细胞生长至约9.0×106cells/mL时,用新鲜培养基将活细胞密度稀释至6.0×106 cells/mL,在MOI为0.005、TPCK-胰酶浓度为5 μg/mL条件下接种病毒,继续培养96 h后收获病毒,收获病毒液的血凝效价(HA效...

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．１新城疫病毒的结构示意图??Ｆｉｇ．?１．１?Ｔｈｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ＮＤＶ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｍｏｄｅｌ??

ＮＡ的复制与转录；外部蛋白包括Ｆ、ＨＮ和Ｍ蛋白，构成病毒的脂质??囊膜［１８］。其中位于囊膜外表面的糖蛋白ＨＮ和Ｆ是ＮＤＶ最重要的两个功能蛋白，分别??形成病毒囊膜表面的大、小纤突，并分别以四聚体和三聚体形式存在。其不仅是ＮＤＶ??毒力和致病性的基础，也是重要的宿主保护性抗原，诱....

图１．２新城疫病毒增殖过程示意图⑴??Ｆｉｇ．?１．２?Ｔｈｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ＮＤＶ?ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｓｓ??

华东理工大学硕士学位论文?第５页??１．２．３新城疫病毒增殖过程??ＮＤＶ是由核酸分子（ＲＮＡ）与蛋白质构成的非细胞形态的粒子，其结构和组成简??单，必须通过宿主细胞才能完成自身增殖。为了进行病毒复制，感染性ＮＤＶ颗粒进入??宿主细胞后劫持其生物合成原材料，并操纵宿主细胞细胞器，....

图３．７稀释比例对ＮＤＶ在ＢＨＫ－ｖ００２细胞中增殖的影响??Ａ：活细胞密度；Ｂ：血凝效价；Ｃ?

?｜－＊－｜?Ｘ??５§６－?Ｉ??＜?＜?Ｉ＇?｜?ｈｈｍ？?ｒ－Ｌ．??由￥?｜??｜２．?ｖ?獨－??Ｑ?＿?１?ｍｍｍ?ｔ?１?＿＿?？?＿＿＿?Ｉ?＿＿?ｉ?一?＂Ｌ?．＿＿＿ｊＭ．Ｍ．?Ｍ．Ｕｉ．．．???．．．．．１．．???．．．．．ｉ．．．．．．！．．．．?．．....

图３．８?ＮＤＶ致ＢＨＫ－Ｖ００２细胞病变结果??－

第２８页?华东理工大学硕士学位论文??释细胞培养液，稀释后检测活细胞密度为６．３ｘｌ〇６ｃｅｌｌｓ／ｍＬ。接种病毒后，２４ｈｐｉ达到最??大活细胞密度，此后逐渐下降，至１４４ｈ培养结束。ＴＣＩＤ５Ｇ在９６ｈ，即４８ｈｐｉ达最大值，??为７．９１ｏｇ１（）ＴＣＩＤ５（）／ｍＬ。病毒....

本文编号：4031113