PA-X蛋白限制H9N2亚型禽流感病毒PA基因重配到哺乳动物流感病毒的机制研究

发布时间：2025-02-11 13:30

　　禽流感病毒不仅引起养禽业的巨大经济损失,而且还严重威胁着人类的健康。引起人类流感大流行的多数病毒均发生了禽流感病毒的基因与哺乳动物流感的基因重配,H9N2亚型禽流感病毒在世界范围内广泛存在,它是当前流行的主要禽流感亚型之一。因此,H9N2亚型禽流感病毒基因与哺乳动物流感病毒发生基因重配的潜在威胁不容忽视。为了了解禽流感病毒和哺乳动物流感病毒聚合酶蛋白不同组合下对聚合酶活性的影响,本研究构建了H9N2亚型禽流感病毒(A/Chicken/Shanghai/2093/2009毒株,简称A2093)和几种哺乳动物流感病毒的PB1、PB2、PA、NP的真核表达质粒。利用体外流感病毒复制子系统,在293T细胞上测定了聚合酶和NP蛋白不同组合下聚合酶活性。结果显示,哺乳动物流感病毒的聚合酶活性比A2093的聚合酶活性高。当A2093的PB1或NP蛋白分别与哺乳动物流感病毒其他聚合酶蛋白组合时,聚合酶活性保持在较高水平;而PB2或PA与哺乳动物流感病毒其他聚合酶蛋白组合时聚合酶活性显著降低。反之,哺乳动物流感病毒的PB1或NP与H9N2禽流感病毒其他聚合酶蛋白组合时,聚合酶活性保持在较低水平;然而当哺乳...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 流感病毒概述
    1.2 流感病毒的转录与复制
        1.2.1 流感病毒转录
        1.2.2 流感病毒复制
    1.3 流感病毒基因重配
    1.4 聚合酶亚基对流感宿主范围的影响
        1.4.1 PB2对流感宿主范围的影响
        1.4.2 PB1对流感宿主范围的影响
        1.4.3 PA对流感宿主范围的影响
    1.5 PA-X蛋白简介
第二章 H9N2亚型禽流感病毒聚合酶及NP蛋白与哺乳动物流感病毒的兼容性
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌种、质粒与细胞株
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器设备
        2.1.4 生物学软件
        2.1.5 引物序列
    2.2 实验方法
        2.2.1 片段的扩增
        2.2.2 重组反应
        2.2.3 重组产物的转化与鉴定
        2.2.4 阳性质粒提取
        2.2.5 聚合酶活性的测定
    2.3 实验结果
        2.3.1 H9N2亚型禽流感病毒和哺乳动物流感病毒单个聚合酶及NP蛋白的兼容性
        2.3.2 A2093毒株与WSN毒株间不同蛋白组合方式下的聚合酶活性
    2.4 讨论
第三章 A2093与WSN聚合酶基因重配对病毒复制的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 质粒与细胞株
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器设备
        3.1.4 引物序列
    3.2 实验方法
        3.2.1 重配病毒的拯救
        3.2.2 重配病毒的鉴定
        3.2.3 重配病毒滴度的测定
        3.2.4 病毒在MDCK细胞上生长曲线
        3.2.5 重配病毒的小鼠致病性实验
    3.3 实验结果
        3.3.1 重配病毒滴度测定
        3.3.2 重配病毒在MDCK细胞上生长曲线
        3.3.3 重配病毒小鼠致病性结果
    3.4 讨论
第四章 PA-X限制禽流感病毒PA基因重配到哺乳动物流感病毒
    4.1 实验材料
        4.1.1 病毒株、细胞株、质粒、载体
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要仪器设备
        4.1.4 引物序列
    4.2 实验方法
        4.2.1 聚合酶活性检测中的不同组合方式蛋白表达水平检测
        4.2.2 PA对 e GFP蛋白表达影响的研究
        4.2.3 PA抑制e GFP蛋白表达与PA-X关系的研究
        4.2.4 A2093与WSN PA-X差异研究
        4.2.5 PA-X蛋白对病毒复制以及对PA重配的影响
    4.3 实验结果
        4.3.1 聚合酶活性检测中的不同组合蛋白表达水平检测结果
        4.3.2 PA对 e GFP蛋白表达影响的结果
        4.3.3 PA抑制e GFP蛋白表达与PA-X关系的研究
        4.3.4 A2093与WSN PA-X差异研究结果
        4.3.5 PA-X蛋白对病毒复制以及对PA重配的影响
    4.4 讨论
第五章 结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：4033336