PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在镉致原代鸡胚肝细胞和肝组织脂肪变性中的作用

发布时间：2025-04-11 00:38

　　根据2014年公布的《全国土壤污染状况公报》,我国因镉(Cadmium,Cd)的大量使用使其成为土壤中超标率最高的无机污染物。近年来随着我国蛋鸡规模化养殖的不断扩大,研究发现环境Cd暴露使得蛋鸡养殖过程中暴露出许多问题,其中蛋鸡肝脏脂肪沉积、肝脏发生脂肪变性、非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)等肝脏脂代谢紊乱相关疾病引起人们的高度重视。线粒体作为机体糖、脂肪、氨基酸代谢的核心细胞器,在维持肝脏脂代谢过程中发挥着重要作用。线粒体损伤直接导致肝脏脂代谢紊乱,细胞和组织内发生脂肪沉积。PINK1/Parkin介导的线粒体自噬参与损伤线粒体的清除,是控制细胞线粒体数量及质量的主要机制。然而,线粒体自噬在Cd致家禽脂肪沉积中的作用机制尚不明确。本试验以原代鸡胚肝细胞和鸡胚肝组织为研究对象,通过蛋白免疫印迹(Western blot)、实时荧光定量(QRT-PCR)、免疫荧光法(Immunofluorescence)等技术手段,揭示PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在Cd致原代鸡胚肝细胞和肝组织脂肪变性中的作用。1.Cd对原代鸡胚肝细...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略语表
第一部分 文献综述
    1 非酒精性脂肪肝研究进展
        1.1 非酒精性脂肪肝的致病因素和病变进程
        1.2 非酒精性脂肪肝的流行病学现状
        1.3 非酒精性脂肪肝相关易感因素
    2 镉致非酒精性脂肪肝研究进展
        2.1 镉致非酒精性脂肪肝的流行病学
        2.2 镉致非酒精性脂肪肝的致病机制
    3 线粒体自噬
        3.1 线粒体自噬的信号通路及调控机制
        3.2 线粒体自噬抑制和过度自噬
    4 本研究的目的和意义
第二部分 试验研究
    第一章 镉致鸡胚肝细胞和肝组织脂肪变性
        1 材料
            1.1 实验动物
            1.2 主要实验仪器
            1.3 主要实验试剂
            1.4 主要试剂配制
            1.5 原代鸡胚肝细胞体外分离培养
            1.6 镉处理原代鸡胚肝细胞和肝组织
            1.7 鸡胚肝组织石蜡切片的制作与HE染色检测脂滴的生成
            1.8 GPO-PAP法测定原代鸡胚肝细胞和肝组织TG含量
            1.9 尼罗红荧光染色检测原代鸡胚肝细胞内脂质的含量
            1.10 QRT-PCR检测原代鸡胚肝细胞和肝组织脂代谢相关基因的转录水平
            1.11 数据分析
        2 结果
            2.1 原代鸡胚肝细胞体外培养
            2.2 不同浓度镉对原代鸡胚肝细胞TG含量的影响
            2.3 不同浓度镉对原代鸡胚肝细胞脂代谢限速酶基因转录水平的影响
            2.4 镉对原代鸡胚肝细胞脂肪滴的影响
            2.5 镉对原代鸡胚肝细胞脂代谢相关基因转录水平的影响
            2.6 不同浓度镉对鸡胚肝组织TG含量的影响
            2.7 不同浓度镉对鸡胚肝组织脂代谢限速酶基因转录水平的影响
            2.8 镉对鸡胚肝组织脂肪滴含量的影响
            2.9 镉对鸡胚肝组织脂代谢相关基因转录水平的影响
        3 讨论
    第二章 镉致原代鸡胚肝细胞和肝组织线粒体自噬
        1 材料与方法
            1.1 实验仪器
            1.2 实验试剂
            1.3 原代鸡胚肝细胞体外分离培养
            1.4 镉处理原代鸡胚肝细胞和肝组织
            1.5 透射电镜观察原代鸡胚肝细胞和肝组织自噬线粒体
            1.6 免疫荧光检测自噬小体和自噬线粒体
            1.7 流式细胞术检测线粒体膜电位
            1.8 Western blot检测原代鸡胚肝细胞和肝组织线粒体自噬相关蛋白表达水平
            1.9 数据分析
        2 结果
            2.1 镉对原代鸡胚肝细胞线粒体超微结构的影响
            2.2 镉对鸡胚肝组织线粒体超微结构的影响
            2.3 镉对原代鸡胚肝细胞线粒体自噬流的影响
            2.4 镉对原代鸡胚肝细胞线粒体膜电位的影响
            2.5 不同浓度镉对原代鸡胚肝细胞线粒体自噬的影响
            2.6 不同浓度镉对鸡胚肝组织线粒体自噬的影响
        3 讨论
    第三章 PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在镉致原代鸡胚肝细胞和肝脏脂肪变性中的作用
        1 材料与方法
            1.1 实验仪器
            1.2 主要实验试剂
            1.3 原代鸡胚肝细胞体外分离培养
            1.4 CsA与Cd单独或共处理原代鸡胚肝细胞和肝组织
            1.5 透射电镜观察原代鸡胚肝细胞和肝组织线粒体超微结构
            1.6 Mito-tracker检测细胞内线粒体数目的变化
            1.7 JC-1检测细胞内线粒体细胞线粒体膜电位的变化
            1.8 Western blot检测原代鸡胚肝细胞和肝组织线粒体自噬相关蛋白
            1.9 GPO-PAP法测定原代鸡胚肝细胞和肝组织TG含量
            1.10 尼罗红染色检测细胞内脂肪滴
            1.11 HE染色检测组织内脂肪滴
            1.12 QRT-PCR检测原代鸡胚肝细胞和组织内脂代谢相关基因的转录水平
            1.13 数据统计分析
        2 结果
            2.1 CsA对镉致原代鸡胚肝细胞线粒体自噬的影响
            2.2 CsA对镉致原代鸡胚肝细胞脂代谢紊乱的影响
            2.3 CsA对镉致鸡胚肝组织线粒体自噬的影响
            2.4 CsA对镉致鸡胚肝组织脂代谢紊乱的影响
        3 讨论
全文结论
参考文献
致谢



本文编号：4039232