苦参碱干预产α-溶血素金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺上皮细胞（bMECs）的损伤作用

发布时间：2025-04-11 01:28

　　金黄色葡萄球菌是引发奶牛乳腺炎的主要病原菌之一,它是一种非典型的胞内寄生菌,可以引起细胞炎症并通过释放多种毒素加重细胞感染,尤其是其释放的α-溶血素,在金黄色葡萄球菌入侵奶牛乳腺组织的过程中通过破坏细胞膜结构从而导致细胞大量死亡。许多研究发现,通过中和作用或抑制毒力因子的分泌就能达到缓解炎症发生,许多中药已经被证明具有很好的中和细菌毒素、抑制细菌毒力蛋白分泌和消除炎症的作用。本课题通过研究苦参碱对产α-溶血素金黄色葡萄球菌损伤奶牛乳腺上皮细胞的干预作用,从而为研究中药干预病原菌损伤宿主细胞的机制奠定基础。首先用二倍稀释法和紫外分光光度计法测定苦参碱对金黄色葡萄球菌的药物敏感性及其对细菌生长的影响;用家兔红细胞溶血实验检测苦参碱对金黄色葡萄球菌α-溶血素活性的影响、实时荧光定量PCR法及Western Bloting检测苦参碱对金黄色葡萄球菌分泌α-溶血素的影响;用CCK-8法和流式细胞仪检测苦参碱对奶牛乳腺上皮细胞的增殖和金黄色葡萄球菌诱导其凋亡的影响;本课题重点研究苦参碱对金黄色葡萄球菌入侵奶牛乳腺上皮细胞的影响并确认其发挥调控作用的通路。发现苦参碱对金黄色葡萄球菌的MIC在1.25 ...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1一金负色翻萄球翻入俊细脑栩型}81}

Ｆｉｇ?１－４?Ｃｕｒｒｅｎｔ?ｍｏｄｅｌｏｆｔｈｅ?Ｓ．?ａｕｒｅｕｓ?ｉｎｖａｓｉｏｎ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍ１８５１??的多样性以及不同分离株的潜在关键分子在体内差异表达１８６１都应该作球菌疫苗考虑之列。一个理想的免疫治疗药剂应该能够防止细菌粘附，消除并中和有毒的外蛋白。因此，....

图２－２苦参碱对金黄色葡萄球菌ＵＳＡ３００生长的影响??Ｆｉｇ?２－２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｍａｔｒｉｎｅ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｇｒｏｗｔｈ?ｏｆ?Ｓ．?ａｕｒｅｕｓ?ＵＳＡ３００．??

２．３．２苦参碱影响金黄色葡萄球菌生长曲线的测定结果??使用紫外分光光度计检测不同浓度苦参碱与金黄色葡萄球菌共培养的ＯＤ６００?ｎｍ，绘制金黄??色葡萄球菌生长曲线，如图２－２所示，发现２５６?ｐｇ／ｍＬ浓度以内的苦参碱并不会影响金黄色葡萄??球菌的生长。??３?：??Ｅ?中０—....

图２－４苦参碱对金黄色葡萄球菌分泌ａ－溶血素的影响??

２．３．５苦参碱对金黄色葡萄球菌ａｇｒ／Ｋ?／７／〇基因相对表达量的影响??Ｗｃｚ基因编码ａ－溶血素的表达，ａｇｒ基因编码的二元调控系统在其上游正向调控ａ－溶血素的??表达，因此通过ＲＴ－ＰＣＲ分析基因Ｗａ和ａｇｒＪ的相对表达量。由图２－３可知，不同浓度的苦参碱作??用于金黄色葡....

图３－ｌ苦参碱对ｂＭＥＣｓ增殖的影响??Ｆｉｇ?３－１?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｍａｔｒｉｎｅ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｂＭＥＣｓ．??

３．３结果??３．３．１苦参碱对ｂＭＥＣｓ增殖的影响作用??本试验用ＣＣＫ－８法测定苦参碱对ｂＭＥＣｓ增殖的作用，由图３－１可知，１００?ｆｉｇ／ｍＬ内的苦参??碱对ｂＭＥＣｓ均无细胞毒性，且对细胞增殖具有一定的提高作用，其中７５?ｎｇ／ｍＬ的苦参碱对细胞??活力的促进作用最大。....

本文编号：4039294