不同来源大肠杆菌ESBLs基因分子流行病学研究

发布时间：2017-06-24 06:10

  本文关键词：不同来源大肠杆菌ESBLs基因分子流行病学研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpCβ-内酰胺酶是革兰阴性杆菌对第三、四代头孢菌素类药物最重要的耐药机制。产CTX-M型ESBLs的大肠杆菌因其能高效水解临床一线药物——三代头孢菌素类药物,且食品源和动物源产ESBLs大肠杆菌可经食物链直接或间接传播给人,给人和动物的健康造成严重威胁。本研究通过比较不同来源(动物、食品和人)产CTX-M型ESBLs大肠杆菌及其质粒的相关性,为正确评估三代头孢菌素类药物在食品动物使用的风险性提供科学依据。2010-2014年间从广州市各地区采集不同来源样品,包括肉类食品(猪肉和鸡肉)、医院病人和社区健康人源、屠宰前食品动物(猪和鸡),分离了931株头孢噻肟非敏感大肠杆菌。采用PCR和测序方法对931株大肠杆菌进行5种ESBLs和p AmpC基因的检测和分析。结果显示,92.8%(864/931)的菌株检测到bla_(CTX-M)、bla SHV、bla DHA和/或bla CMY基因,其中bla_(CTX-M)-14、bla _(CTX-M-55)和bla_(CTX-M-65)是主要的流行型,分别有251株、150株和124株。另外,有73株携带blaCMY基因。bla_(CTX-M)在肉类食品源大肠杆菌中检出率最高为86.5%;blaCMY在食品动物源中检出率最高10.6%。bla_(CTX-M-1G)、bla CMY、bla _(CTX-M-55)和bla_(CTX-M-24a)阳性检出率在食品动物源菌株中最高,其次为肉类食品源和人源。blaCTX-M和blaCTX-M-65在肉类食品源菌株中检出率最高,说明肉类食品被耐药菌严重污染。bla_(CTX-M-14)和bla_(CTX-M-15)在人源菌株中检出率最高,其次为食品动物源和肉类食品源。采用琼脂稀释法测试了931株不同来源大肠杆菌对20种抗菌药的敏感性,结果发现,对氨苄西林、头孢噻肟、链霉素、复方新诺明和四环素的耐药率均超过70%,受试的所有菌株对亚胺培南敏感。人、食品动物和肉类食品三种不同来源大肠杆菌均表现对多种抗菌药物耐药,但对不同药物的耐药率有显著差异。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和大肠杆菌系统进化分群方法研究100株bla _(CTX-M-55)阳性菌株的克隆关系。结果表明大部分bla _(CTX-M-55)阳性菌为非克隆传播关系,且多属于A组(45.0%),未检测出B2组大肠杆菌。采用接合实验、化学转化和质粒复制子分型方法研究bla _(CTX-M-55)的水平传播和质粒特征。100株bla _(CTX-M-55)阳性菌株成功获得了60株接合子和转化子,对质粒进行复制子分型,发现食品动物源bla_(CTX-M-55)菌株以Inc FII型质粒为主,而人源和肉类食品源菌株以Inc FII型和Inc I1型质粒为主。综上所述,产ESBLs大肠杆菌在人源、食品动物源和肉类食品源中分布广泛,且bla _(CTX-M-55)的流行主要以Inc FII型质粒水平传播为主,其可能通过食物链从动物传播到人。
【关键词】：超广谱β-内酰胺酶(ESBLs) bla_(CTX-M) 大肠杆菌
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.612;R378.21
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 1 前言11-16
• 2 材料与方法16-33
• 2.1 材料16-17
• 2.1.1 样品来源16
• 2.1.2 工程菌株16
• 2.1.3 抗菌药物16-17
• 2.2 细菌培养基和生化鉴定管17-20
• 2.2.1 酶和主要试剂17-19
• 2.2.2 主要仪器和设备19-20
• 2.3 方法20-33
• 2.3.1 大肠杆菌的收集20-21
• 2.3.2 ESBLs和p AmpC基因的检测21-23
• 2.3.3 抗菌药物敏感性试验23-24
• 2.3.4 大肠杆菌种族系统进化分析24-25
• 2.3.5 脉冲场凝胶电泳25-27
• 2.3.6 接合试验27-28
• 2.3.7 化学转化28-29
• 2.3.8 质粒提取29-31
• 2.3.9 质粒复制子分型31-33
• 2.3.10 数据处理33
• 3 结果33-49
• 3.1 ESBLs和pAmpC基因的检测33-34
• 3.2 ESBLs和pAmpC基因类型统计分析34-40
• 3.3 头孢噻肟非敏感大肠杆菌MIC结果40-41
• 3.4 产CTX-M-55大肠杆菌种族系统进化关系结果41
• 3.5 产CTX-M-55大肠杆菌PFGE结果41-47
• 3.6 bla_(CTX-M-55)基因的接合、转化结果47
• 3.7 bla_(CTX-M-55)阳性复制子分型结果47-49
• 4 讨论49-53
• 4.1 大肠杆菌ESBLs和p AmpC基因型流行特征49-50
• 4.2 不同来源产CTX-M大肠杆菌耐药性分析50-52
• 4.3 bla_(CTX-M-55)大肠杆菌遗传特征52
• 4.4 bla_(CTX-M-55)质粒复制子分型52-53
• 5 全文结论53-54
• 致谢54-55
• 参考文献55-62

【参考文献】

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本文编号：477283