天府肉羊SCD1基因在肌肉中的表达与棕榈油酸和油酸含量的相关性研究

发布时间：2017-06-26 13:13

  本文关键词：天府肉羊SCD1基因在肌肉中的表达与棕榈油酸和油酸含量的相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：硬脂酰辅酶A脱氢酶(SCD, stearoyl-CoA desaturase)属于内质网膜结合蛋白,是饱和脂肪酸向单不饱和脂肪酸转化的限速酶。无论是从头合成还是从日粮中获取的饱和脂肪酸,SCD均可以催化其在9号和10号碳原子之间脱氢形成一个双键。SCD主要催化软脂酸和硬脂酸形成棕榈油酸和油酸,而且SCD在调节细胞膜流动性和脂类代谢过程中也有着重要作用,这一作用是通过调节饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸的比例完成的,提高这个比例会引发一系列疾病,例如：肥胖、高血压、糖尿病、免疫紊乱、心血管疾病和癌症等。单不饱和脂肪酸在诸多疾病中的积极作用,使其在“健康肉”的生产中具有重要意义。此外,SCD1基因的单核苷酸多态性对肉质中的pH、大理石纹等级、失水率、熟肉率、肌内脂肪含量和肌肉颜色等性状有显著影响。本试验采用RT-PCR、分子克隆、RT-qPCR、Western blotting以及气象色谱法等实验技术对SCD1基因和肌肉脂肪酸进行了初步研究,结果如下：1.获得天府肉羊SCD1基因的编码区全序列,序列长1080bp(GeneBank:KT315581),编码359个氨基酸。SCD1蛋白是疏水蛋白,含有12个磷酸化位点、4个跨膜结构域和一个可能的N-糖基化位点,不含信号肽序列。核酸和氨基酸序列比对发现,SCD1基因与哺乳动物具有高度的相似性,其中和绵羊的相似性最高。系统进化树分析表明,天府肉羊SCD1基因与绵羊和牛的SCD1基因同源性最高,与黄颡鱼SCD1基因同源性最低。2.采用RT-qPCR方法分析SCDl基因在90、180和270日龄天府肉羊的8个肌肉组织中的表达情况,结果表明,在检测的肌肉组织中均有SCD1表达,并且日龄、肌肉及日龄与肌肉的交互作用对SCD1基因的mRNA相对表达水平均有极显著影响。相同日龄不同肌肉的天府肉羊SCD1基因相对表达量的多重比较结果表明：3个年龄段的三角肌的SCD1基因相对表达量均极显著高于其他7个肌肉组织(P0.01);90日龄臂三头肌的SCD1基因相对表达量极显著高于腓肠肌和半膜肌(P0.01);180日龄腓肠肌、臂三头肌和股二头肌的SCDl基因相对表达量极显著高于股四头肌(P0.01);270日龄股二头肌的SCD1基因相对表达量极显著高于除三角肌以外的其他6个肌肉组织(P0.01),并且臂三头肌、半膜肌和背最长肌的SCD1基因相对表达量极显著高于臀中肌、腓肠肌和股四头肌(P0.01)。相同肌肉在不同日龄的天府肉羊SCD1基因相对表达量的多重比较表明：天府肉羊8个肌肉组织的SCD1基因相对表达量均表现出与日龄密切相关的趋势,SCD1基因相对表达量先升高后降低,在180日龄达到最大值(P0.01),三角肌、股二头肌、股四头肌、腓肠肌(P0.01)和背最长肌、半膜肌(P0.05)在3月龄的SCD1基因相对表达量最低。3. 采用Western blotting方法分析SCD1蛋白在90、180和270日龄天府肉羊的8个肌肉组织中的表达情况,结果表明,在所有检测的肌肉组织中均有SCD1表达,3个年龄段的半膜肌SCD1蛋白表达量均极显著低于同日龄其他7个肌肉组织(P0.01),90日龄背最长肌和三角肌的SCD1蛋白表达量极显著高于其他6个肌肉组织(P0.01),180日龄三角肌的SCD1蛋白表达量极显著高于其他7个肌肉组织(P0.01),270日龄臀中肌的SCD1蛋白表达量极显著高于其他7个肌肉组织(P0.01)。4. 采用气相色谱法分析测定90、180和270日龄天府肉羊的8个肌肉组织中棕榈油酸和油酸的含量,结果表明,日龄对棕榈油酸和油酸含量有极显著影响(P0.01),而肌肉以及肌肉和日龄的互作效应对这两种脂肪酸的含量影响不显著。棕榈油酸在180日龄的背最长肌和臂三头肌中的含量显著高于臀中肌(P0.05),油酸在270日龄的半膜肌中的含量显著高于股四头肌。除此之外,两种脂肪酸在三个年龄段中不同肌肉间的含量没有显著性差异。随着日龄的增长,棕榈油酸在各肌肉组织中的含量逐渐降低,而油酸的含量逐渐升高。臀中肌、三头肌、股四头肌和腓肠肌在90日龄的棕榈油酸含量极显著高于270日龄(P0.01),背最长肌、角肌、股二头肌和半膜肌在90日龄的棕榈油酸含量显著高于270日龄(P0.05)。背最长肌、三角肌、股二头肌和半膜肌在270日龄的油酸含量显著高于90日龄(P0.05),其他4个肌肉组织在270日龄的油酸含量与90日龄无显著性差异。5. 对SCD1基因、蛋白表达水平与肌肉组织中棕榈油酸和油酸的相关性分析表明,SCD1基因在肌肉组织中的表达量与棕榈油酸和油酸含量没有显著的相关性。SCD1蛋白表达量与棕榈油酸含量呈负相关关系,相关系数为-0.644(P0.01);SCD1蛋白表达量与油酸含量呈正相关关系,相关系数为0.675(P0.01)。
【关键词】：SCD1 天府肉羊 组织表达 棕榈油酸 油酸 相关分析
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S826
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 常用词语缩写10-14
• 1 文献综述14-23
• 1.1 单不饱和脂肪酸14-16
• 1.2 SCD基因的研究进展16-22
• 1.2.1 SCD基因的发现16
• 1.2.2 SCD基因的分类16
• 1.2.3 SCD基因的结构16-17
• 1.2.4 SCD1基因的功能17-21
• 1.2.5 SCD1基因的表达与调控21-22
• 1.2.6 SCD1基因与肉质22
• 1.3 本研究的目的与意义22-23
• 2 材料与方法23-36
• 2.1 试验材料23-26
• 2.1.1 试验动物与样品采集23
• 2.1.2 主要仪器设备23-24
• 2.1.3 主要试剂及试剂盒24-25
• 2.1.4 主要试剂的配制25-26
• 2.2 试验方法26-36
• 2.2.1 总RNA的提取26-27
• 2.2.2 总RNA质量和浓度检测27
• 2.2.3 cDNA的合成27-28
• 2.2.4 引物设计28
• 2.2.5 SCD1基因cDNA克隆测序28-30
• 2.2.6 荧光定量PCR30-32
• 2.2.7 蛋白质免疫杂交(Western Bloting)32-35
• 2.2.8 肌肉脂肪酸含量的测定35-36
• 2.2.9 统计分析36
• 3 结果与分析36-49
• 3.1 总RNA检测36-37
• 3.2 SCD1基因克隆与序列分析37-42
• 3.2.1 SCD1基因RT-PCR结果37-38
• 3.2.2 SCD1基因克隆产物测序38-39
• 3.2.3 SCD1基因序列比对39-40
• 3.2.4 SCD1基因进化树的构建40
• 3.2.5 SCD1蛋白质理化性质分析40-42
• 3.3 SCD1基因荧光定量PCR结果42-45
• 3.3.1 引物正确性验证42
• 3.3.2 标准曲线和熔解曲线42-43
• 3.3.3 SCD1基因mRNA相对表达结果43-45
• 3.4 SCD1蛋白表达结果45-46
• 3.5 天府肉羊肌肉棕榈油酸和油酸含量46-48
• 3.6 SCD1基因相对表达量与棕榈油酸、油酸的相关分析48
• 3.7 SCD1蛋白表达量与棕榈油酸、油酸的相关分析48-49
• 4 讨论49-52
• 4.1 SCD1基因生物信息学分析49-50
• 4.1.1 SCD1基因cDNA序列分析49
• 4.1.2 SCD1蛋白序列分析49-50
• 4.2 SCD1基因的MRNA表达分析50-51
• 4.3 SCD1蛋白表达分析51
• 4.4 棕榈油酸和油酸含量分析51
• 4.5 SCD1基因、蛋白表达与棕榈油酸、油酸含量的相关性分析51-52
• 4.5.1 SCD1基因表达量与棕榈油酸、油酸含量的相关性分析51-52
• 4.5.2 SCD1蛋白表达量与棕榈油酸、油酸含量的相关性分析52
• 5 结论52-53
• 参考文献53-57
• 致谢57-58
• 附录58-61
• 攻读硕士期间发表的论文61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 佘珠花;气相色谱法中油脂脂肪酸衍生化方法及其选择[J];粮食加工;2004年06期

2 闫少芳,肖颖,王军波,梁学军,刘毅;富含单不饱和脂肪酸的坚果对高脂大鼠血脂水平的影响[J];卫生研究;2003年02期

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本文编号：486255