利用CDK抑制剂—SU9516体外生产猪孤雌激活四倍体囊胚

发布时间：2017-06-28 21:16

  本文关键词：利用CDK抑制剂—SU9516体外生产猪孤雌激活四倍体囊胚，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：现如今,四倍体广泛的应用在动物繁殖技术领域中,特别是在干细胞中利用四倍体和二倍体制备嵌合体来研究动物胚外组织缺陷。通过不同的技术有多种四倍体囊胚的制作方法,但是不同制备方法都存在不同程度的优缺点,需要不断开发新的四倍体制备方法。因此,本研究使用一种新型细胞周期性依赖激酶(cyclin-dependent kinase, CDK)抑制剂SU9516体外高效诱导猪孤雌激活(parthenogenetic activation, PA)四倍体囊胚。SU9516可以通过抑制猪PA胚胎第二极体的排出以及抑制中心体复制两方面来体外制备猪PA四倍体囊胚。同时,SU9516可以通过抑制CDKI活性间接降低MPF活性来提高猪PA胚胎体外发育能力。本研究主要包括以下几个实验：一、SU9516体外制备猪PA四倍体囊胚。试验1：电激活猪胚胎之后,在猪PA胚胎体外培养液中添加不同浓度SU9516促进猪其体外发育能力。结果表明：添加10 μMSU9516与其他浓度(1 μM,5 μM,100μM)及素对照组5 μg/ml细胞松弛(cytochalasin B, CB)相比可以显著地提高猪PA胚胎体外发育能力(47.5% vs.26.2%,28.9%,40.6%, and 25.8%, P 0.05)。用最佳浓度(10μM)SU9516处理不同的时间后观察胚胎体外发育能力,结果表明：SU9516处理4h猪PA胚胎具有最好的体外发育能力(47.5%vs.39.0%,33.7%, and 39.1%).试验2：电激活猪PA胚胎之后,分别利用添加10 μM SU9516或5μg/ml CB的体外培养液中处理2h后观察猪PA胚胎第二极体的排出情况。结果表明：10μMSU9516组,5 μg/ml CB组与未处理组相比显著地降低了第二极体的排出率(14.0%,13.8% vs.78.8% P 0.05).为了确定囊胚的染色体组数,对SU9516组合、CB组处理后获得的猪PA囊胚进行核型分析。结果显示：SU9516处理组的囊胚中四倍体率显著地高于CB处理组(55.8%vs.14.0 P0.05)试验3：为了进一步确认不同处理组中猪PA囊胚的染色体组数。利用Hoechest33342染色不同处理组中的细胞数目。结果表明：SU9516处理组中囊胚细胞数显著地低于CB组以及6-DMAP组(34.4±17.5bvs.46.4±10.5a,45.1±10.6a)。二、SU9516抑制MPF活性提高猪PA胚胎体外发育能力。实验1：分别检测10μM SU9516和5μg/ml CB处理猪PA胚胎4 h后MPF表达活性。结果显示：SU9516处理下的猪PA胚胎MPF活性水平显著地低于CB组(103.2pg/ml vs.131 pg/ml)。总结：1、1)SU9516处理提高猪PA胚胎体外发育能力最佳条件为10μM,4 h。2)SU9516可以抑制猪PA胚胎第二极体排出和诱导猪PA四倍体囊胚。3)SU9516处理可以显著地降低猪PA囊胚细胞数。2、SU9516通过对MPF活性的改变来提高猪PA胚胎体外发育能力。
【关键词】：猪 SU9516 孤雌生殖 囊胚 四倍体 成熟促进因子
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S828
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 第一章 前言12-23
• 1.1 哺乳动物四倍体胚胎的制备方法12-15
• 1.1.1 显微注入法制备四倍体囊胚13-14
• 1.1.2 抑制法制备四倍体囊胚14
• 1.1.3 融合法制备四倍体囊胚14-15
• 1.2 四倍体胚胎的应用15-17
• 1.2.1 四倍体补偿技术简介15
• 1.2.2 四倍体囊胚在胚胎干细胞上的应用15-16
• 1.2.3 四倍体囊胚在诱导多功能干细胞上的应用16-17
• 1.3 MPF与SU951617-19
• 1.3.1 MPF的研究进展17
• 1.3.2 MPF与卵母细胞孤雌激活的关系17-18
• 1.3.3 SU9516的生物学作用18-19
• 1.3.4 SU9516与癌症治疗19
• 1.4 孤雌激活19-22
• 1.5 本试验研究意义22-23
• 第二章 材料与方法23-34
• 2.1 试验材料与仪器23-25
• 2.1.1 试验时间与地点23
• 2.1.2 试验材料23
• 2.1.3 试验主要药品23-24
• 2.1.4 试验主要仪器24-25
• 2.2 实验药品配制与试验方法25-32
• 2.2.1 试验药品配制25-30
• 2.2.2 试验方法30-32
• 2.3 试验设计32-33
• 2.3.1 不同浓度SU9516对猪孤雌激活胚胎体外发育能力影响32
• 2.3.2 不同时间SU9516对猪孤雌激活胚胎外发育能力的影响32
• 2.3.3 观察不同药物处理对猪PA囊胚细胞数影响32-33
• 2.3.4 观察SU9516处理对猪孤雌激活胚胎第二极体排出情况影响33
• 2.3.5 观察SU9516处理对猪PA胚胎染色体数目影响33
• 2.3.6 测量SU9516对猪孤雌激活胚胎MPF活性影响33
• 2.4 统计分析33-34
• 第三章 结果与分析34-40
• 3.1 不同浓度及时间SU9516处理对猪孤雌激活胚胎体外发育能力影响34-35
• 3.1.1 不同浓度SU9516处理对猪孤雌激活胚胎体外发育能力影响34
• 3.1.2 不同时间SU9516处理对猪孤雌激活胚胎体外发育能力影响34-35
• 3.2 SU9516处理对猪孤雌激活胚胎第二极体以及囊胚染色体数目影响35-37
• 3.2.1 SU9516处理对猪孤雌激活胚胎第二极体排出情况影响35-36
• 3.2.2 SU9516处理对猪孤雌激活囊胚染色体数目影响36-37
• 3.3 观察不同药物处理对猪孤雌激活囊胚细胞数的影响37-39
• 3.4 SU9516处理后对猪孤雌激活胚胎中MPF活性的影响39-40
• 第四章 讨论40-44
• 4.1 卵母细胞孤雌激活发展40
• 4.2 影响猪PA卵母细胞体外发育能力的因素40-41
• 4.3 猪卵母细胞孤雌激活囊胚质量分析41
• 4.4 猪PA激活胚胎染色体组数与第二极体关系41-42
• 4.5 猪孤雌激活胚胎染色体组数分析42
• 4.6 四倍体补偿技术42-43
• 4.7 MPF组成及活性43
• 4.8 SU9516对卵母细胞激活的作用43-44
• 第五章 结论44-45
• 参考文献45-55
• 致谢55-57
• 研究生期间已发表的论文57-58
• 附图58-59
• 附表59

【相似文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 郭庆;利用CDK抑制剂—SU9516体外生产猪孤雌激活四倍体囊胚[D];延边大学;2016年

  本文关键词：利用CDK抑制剂—SU9516体外生产猪孤雌激活四倍体囊胚，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：495297