NA蛋白对流感病毒受体结合特性的影响及鸭源H7N9流感病毒生物学特性的研究

发布时间：2017-07-05 19:06

  本文关键词：NA蛋白对流感病毒受体结合特性的影响及鸭源H7N9流感病毒生物学特性的研究

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【摘要】：探索影响流感病毒受体结合特性的因素对于揭示流感病毒的致病性及传播能力具有重要的意义。流感病毒结合SAα-2,3Gal(禽源受体)转换为结合SAα-2,6Gal(人源受体)是禽流感病毒适应人类宿主并引起流感大流行的关键因素。本研究选取了2株H7亚型流感病毒A/chicken/Jilin/SD020/2014(H7N2)(简称JL/020)和A/Anhui/1/2013(H7N9)(简称AH/1),其成熟HA仅57和312位(H3为基准)氨基酸有差异。同源建模发现HA上57和312位点与流感病毒受体结合结构域相距较远,但是仍不能完全排除其对病毒受体结合特性的影响。利用反向遗传操作技术,我们构建了一系列重组病毒和点突变病毒,并利用固相ELISA来检测其受体结合特性。结果表明HA上的57和312位氨基酸不影响流感病毒的受体结合特异性,而NA影响了流感病毒受体结合特性。交叉血凝抑制试验(HI)结果表明,H7单因子血清、H7N9全病毒血清对拯救的JL/020和AH/1病毒株的抑制价没有差异,而N2单因子血清对病毒的抑制能力有差异,表明NA影响了病毒受体结合特性。本研究表明,除HA以外,NA也能够影响流感病毒的受体结合特性,这为进一步研究流感病毒受体结合特性及应对流感大流行提供了理论基础。2014年流感病毒监测中,我们从浙江、福建和广西活禽市场鸭子体内分离到了4株H7N9流感病毒。为了解4株鸭源H7N9流感病毒的生物学特性,我们对病毒的遗传演化、抗原性、受体结合特性以及对BALB/c小鼠的致病性4个方面进行了分析。遗传进化分析结果表明4株鸭源H7N9流感病毒8个基因片段与2013年新型H7N9流感病毒来源不同,并且亲缘关系较远。根据核苷酸相似性与系统发育树,可以将4株鸭源H7N9流感病毒分为3个基因型,其中DK/ZJ/S4488/2014和DK/ZJ/S4489/2014属于同一个基因型。抗原性结果表明4株鸭源H7N9流感病毒与2013年新型H7N9流感病毒抗原差异较大。受体结合特性结果表明4株鸭源H7N9流感病毒可以同时结合SAα-2,3Gal受体和SAα-2,6Gal受体,并且结合SAα-2,3Gal受体的能力强于结合SAα-2,6Gal受体的能力。BALB/c小鼠致病性结果表明4株鸭源H7N9流感病毒可以高效地在小鼠鼻甲和肺部复制,而且病毒可以突破血脑屏障,在小鼠脑组织中复制,结果表明这4株鸭源H7N9流感病毒对BALB/c小鼠具有较强的致病能力。本研究表明鸭源H7N9流感病毒具有较强的致病性,对公众造成的健康威胁不容忽视。
【关键词】：NA蛋白 受体结合特异性 鸭源H7N9流感病毒 遗传演化 抗原性 致病性
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-12
• 英文缩略表12-13
• 第一章 前言13-23
• 1.1 禽流感病毒综述13-16
• 1.1.1 禽流感病毒的生物学特征13-14
• 1.1.2 影响流感病毒的受体结合特性的因素14-16
• 1.2 H7N9流感病毒概述16-17
• 1.3 流感病毒研究用动物模型17-19
• 1.3.1 小鼠模型17-18
• 1.3.2 豚鼠模型18-19
• 1.3.3 雪貂模型19
• 1.4 流感病毒致病性的机制19-21
• 1.4.1 HA19-20
• 1.4.2 PB1-F220
• 1.4.3 聚合酶蛋白20
• 1.4.4 NS120-21
• 1.5 本研究的目的和意义21-23
• 第二章 NA蛋白对流感病毒受体结合特性影响的研究23-29
• 2.1 材料和方法23
• 2.1.1 病毒及主要实验材料23
• 2.1.2 试剂23
• 2.2 实验方法23-24
• 2.2.1 HA序列比对及同源建模23
• 2.2.2 点突变及拯救重组病毒23-24
• 2.2.3 病毒纯化24
• 2.2.4 病毒受体结合特性的检测24
• 2.2.5 血凝抑制试验24
• 2.3 结果24-28
• 2.3.1 HA序列比对及同源建模结果24-25
• 2.3.2 拯救的病毒及测序结果25-26
• 2.3.3 病毒受体结合特性结果26-27
• 2.3.4 血凝抑制结果27-28
• 2.4 讨论28-29
• 第三章 鸭源H7N9流感病毒的遗传演化分析29-44
• 3.1 材料与方法29-30
• 3.1.1 病毒株29
• 3.1.2 试剂29
• 3.1.3 病毒的纯化增殖29
• 3.1.4 病毒核酸提取及反转录29-30
• 3.1.5 PCR产物纯化及上机测序30
• 3.1.6 序列拼接及分析30
• 3.1.7 生物安全30
• 3.2 结果30-42
• 3.2.1 鸭源H7N9流感HA进化分析30-31
• 3.2.2 鸭源H7N9流感NA进化分析31
• 3.2.3 鸭源H7N9流感PB2基因进化分析31-32
• 3.2.4 鸭源H7N9流感PB1基因进化分析32
• 3.2.5 鸭源H7N9流感PA基因进化分析32-33
• 3.2.6 鸭源H7N9流感NP基因进化分析33
• 3.2.7 鸭源H7N9流感M基因进化分析33
• 3.2.8 鸭源H7N9流感NS基因进化分析33-42
• 3.2.9 鸭源H7N9流感基因型划分42
• 3.3 讨论42-44
• 第四章 鸭源H7N9流感病毒的抗原性分析44-46
• 4.1 材料与方法44
• 4.1.1 病毒株44
• 4.1.2 实验动物44
• 4.1.3 血清44
• 4.1.4 血清的交叉血凝-血凝抑制实验44
• 4.2 结果44-45
• 4.2.1 交叉HA-HI试验结果44-45
• 4.3 讨论45-46
• 第五章 鸭源H7N9流感病毒的受体结合特性分析46-49
• 5.1 材料46
• 5.1.1 病毒株46
• 5.2 实验方法46
• 5.2.1 病毒纯化46
• 5.2.2 病毒受体结合特性分析46
• 5.3 实验结果46-48
• 5.4 讨论48-49
• 第六章 鸭源H7N9流感病毒对BALB/C小鼠的致病性研究49-56
• 6.1 材料与方法49
• 6.1.1 病毒49
• 6.1.2 实验材料49
• 6.1.3 生物安全49
• 6.1.4 鸡胚半数感染量（EID50）的测定49
• 6.1.5 病毒对BALB/c小鼠致病实验49
• 6.2 结果49-54
• 6.2.1 病毒鸡胚半数感染量（EID50）49-50
• 6.2.2 病毒在小鼠体内复制情况50-51
• 6.2.3 小鼠体重变化51-54
• 6.3 讨论54-56
• 第七章 全文结论56-57
• 参考文献57-65
• 致谢65-66
• 作者简介66

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7 ;高温、紫外线等是流感病毒的克星[J];农村科学实验;2005年12期

8 郑宾;钟江;;禽流感蔓延给人类敲响警钟[J];科学生活;2005年11期

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10 王小平;;流感病毒的变异[J];大自然探索;1989年02期

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1 伍锐;段正赢;刘泽文;杨克礼;梁望旺;邓均华;周丹娜;田永祥;;A型流感病毒为载体的开发及其应用[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年

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5 杨琴;张兴晓;杨灵芝;郭庆栋;;流感病毒在三种细胞中的生长对比[A];山东畜牧兽医学会禽病学专业委员会第一次学术研讨会论文集[C];2009年

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8 李叶;廖明;辛朝安;;A型流感病毒对小鼠致病机制的研究进展[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年

9 曲敬来;常晓;;流感病毒A上呼吸道感染快速诊治的研究[A];2005年全国危重病急救医学学术会议学术论文集[C];2005年

10 祝艳华;王雯慧;陈怀涛;;中药抗流感病毒作用的研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十五次、中国病理生理学会动物病生专业委员会第十四次学术讨论会论文集[C];2007年

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1 记者 江卉邋通讯员 胡运海 实习生 汪红燕;今冬江城流感病毒有加剧趋势[N];湖北日报;2008年

2 ;新流感病毒可能已在猪身上悄悄传播多年[N];新华每日电讯;2009年

3 记者 葛进　陈超;日拍到新型流感病毒真实形态[N];科技日报;2009年

4 特约记者 吴志军　记者 蔡鹏程;研制成功迅速杀灭流感病毒新产品[N];解放军报;2009年

5 河北省邢台市第一医院副主任医师 黄根柱;流感病毒有四怕[N];健康报;2009年

6 本报记者 马佳;陈继明：为流感病毒绘制族谱[N];北京科技报;2009年

7 江南雪舞;禽流感病毒与流感病毒有何关系？[N];大众卫生报;2005年

8 主任医师 冀衡;流感病毒[N];农村医药报（汉）;2003年

9 杨孝文　编译;揭开20世纪初西班牙大流感致命秘密[N];北京科技报;2007年

10 本报驻美国记者 毛黎;“狼”依然在家门口徘徊[N];科技日报;2008年

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10 王攀;MicroRNA在甲型H1N1流感病毒介导肺部炎性损伤调控作用的研究[D];四川农业大学;2013年

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