牛MEN1基因真核表达载体的构建及其表达分析

发布时间：2017-07-06 00:03

  本文关键词：牛MEN1基因真核表达载体的构建及其表达分析

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【摘要】：多发性内分泌腺瘤致病因子1(multiple endocrine neoplasiaⅠ,MEN1)参与乳腺发育与泌乳行为的调控。本研究克隆了牛(Bos taurus)MEN1基因(b MEN1)的全长c DNA,并在不同细胞中检测b MEN1m RNA及其编码蛋白menin的表达情况。根据Gen Bank中b MEN1基因序列,设计特异性引物,用q RTPCR方法得到附带Eco RⅠ和HindⅢ酶切位点的b MEN1片段,并将其克隆到真核表达载体pc DNA3.1-myc-his(A)中。体外转染物种同源性细胞牛乳腺上皮细胞(bovine mammary gland epithelial cell,MAC-T)和异源性细胞中国仓鼠(Cricetulus barabensis)卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO)、小鼠(Mus musculus)成肌细胞(mouse myoblast cells,C2C12),利用q RT-PCR和Western blot技术检测转染前后b MEN1 m RNA和蛋白menin的表达。双酶切和基因测序结果表明,成功构建了b MEN1基因的真核表达载体pc DNA3.1-myc-his-b MEN1。所建立的转染体系可以使目的基因b MEN1在3种不同细胞中成功表达m RNA和目的蛋白,转染后24 h都达到最高表达量,并达到极显著水平(P0.01),之后逐渐降低。其中,CHO细胞中的转染24 h后b MEN1 m RNA和menin蛋白的表达量分别是对照的28 415倍和5.65倍。本研究建立了b MEN1基因的真核表达载体及其转染体系,能够在不同细胞中成功表达,为体外研究MEN1基因对于乳腺的调节功能及其对于机体代谢的调节机制提供了一种工具和技术体系。
【作者单位】： 山东农业大学动物科技学院/山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室;
【关键词】： 牛多发性内分泌腺瘤致病因子基因(b MEN) 真核表达 奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T) 中国仓鼠卵巢细胞(CHO) 小鼠成肌细胞(CC)
【基金】：国家自然科学基金(No.31402054) 山东省自然科学基金(No.ZR2013CM013) 山东省奶牛良种工程重大课题(No.2012LZ15) 山东省泰山学者种业创新人才团队计划培养项目(No.2014LZ07-04) 国家奶业产业技术体系资助项目(No.CARS-37) 山东省牛产业技术体系资助项目(No.SDAIT-12-011-06)
【分类号】：S823
【正文快照】： 近年来的研究表明,多发性内分泌腺瘤致病因子1(multiple endocrine neoplasiaⅠ,MEN1)基因对于机体维持正常代谢功能发挥着重要的调控功能,其功能缺失可形成家族性遗传疾病,而且是一个抑癌基因(Yang et al.,2007)。该基因可在全身多个器官组织中表达(Chandrasekharappa et al.

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本文编号：524034