犬BMSCs干细胞的分离培养及成骨诱导分化

发布时间：2017-07-06 14:26

  本文关键词：犬BMSCs干细胞的分离培养及成骨诱导分化

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【摘要】：为了体外分离犬(Canis lupus)骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymai stem cells,BMSCs),并对其进行成骨诱导分化及鉴定,本研究用全骨髓贴壁法分离培养犬BMSCs,待细胞克隆成片后传代。在传代过程中,取不同代数的细胞进行生长曲线测定;取传至第2代(p2)细胞,对诱导前的细胞和成骨诱导分化10和21 d的细胞采用q RT-PCR鉴定性别决定基因相关转录因子2(SRY-related high-monility-group(HMG)-box protein-2,SOX2)、干细胞特异基因POU5f1转录因子4(octamer-binding transcription factor-4,OCT4)和NANOG 3个多能性干细胞标志基因及成骨细胞特异基因骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)和骨粘连蛋白(osteonectin,ONN)基因的表达;成骨诱导分化的细胞进行成骨细胞特异性指标碱性磷酸酯酶(alkaline phosphatase,ALP)、茜素红染色鉴定。结果表明,p5和p10细胞的生长曲线基本保持一致,而p20细胞的生长速度明显低于p5和p10。犬BMSCs表达OCT4和SOX2,但不表达NANOG;成骨细胞诱导10 d仍低水平表达OCT4和SOX2,但成骨细胞诱导21 d,不再表达OCT4和SOX2。随着诱导时间的延长,成骨细胞特异OCN和ONN基因的表达量增加。进行成骨诱导7 d后,ALP活性明显上升;成骨诱导10 d,未形成钙化结节;成骨诱导21 d,形成钙化结节,钙化结节被茜素红染成红色,随着诱导时间的延长,形成的钙化结节明显增多。证明犬BMSCs被成功地诱导为成熟的成骨细胞,可作为种子细胞用于兽医临床上犬的重症骨折、骨营养不良性关节病等疾病的治疗提供基础资料,为宠物犬临床疑难疾病的治疗开辟一条新途径。
【作者单位】： 西北农林科技大学动物医学院/农业部动物生物技术重点实验室;
【关键词】： 犬 骨髓间充质干细胞(BMSCs) 体外培养 成骨诱导分化 细胞鉴定
【基金】：西北农林科技大学基本科研创新专项(No.QN2011107)
【分类号】：S829.2
【正文快照】： 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchy-mai stem cells,BMSCs)是来源于骨髓的非造血干细胞,除了具有成体干细胞的特点外,同时还具有胚胎干细胞的特点。相关研究证明,BMSCs表达胚胎干细胞特异基因NANOG、性别决定基因相关转录因子2(SRY-related high-monilitygroup(HMG)-box

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