猪δ冠状病毒Nsp5的体外表达及其蛋白酶活性分析

发布时间：2017-07-08 06:31

  本文关键词：猪δ冠状病毒Nsp5的体外表达及其蛋白酶活性分析

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【摘要】：猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCo V)是一种新发现的肠道冠状病毒,可引起仔猪的腹泻。冠状病毒编码的非结构蛋白Nsp5是一种3C样蛋白酶,在病毒多聚前体蛋白加工以及免疫调节中发挥重要作用。本研究以PDCo V CHN-HN-2014株为模板,通过RT-PCR扩增Nsp5基因并将其克隆到原核表达载体p ET-28a(+)中,构建了重组表达质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后SDS-PAGE检测,结果表明Nsp5可在大肠杆菌中高效、可溶性表达。采用镍亲和层析对表达的Nsp5蛋白进行纯化,并通过荧光共振能量转移方法检测了其蛋白酶活性,结果表明纯化的Nsp5蛋白能够有效切割含有PDCo V Nsp5氨基端自切割位点的十二肽底物,证实体外表达的Nsp5重组蛋白具有良好的蛋白酶切割活性。猪δ冠状病毒Nsp5蛋白的克隆、表达及其蛋白酶活性检测,为深入研究该蛋白的功能奠定了基础。
【作者单位】： 华中农业大学动物医学院;华中师范大学第一附属中学;
【关键词】： 猪δ冠状病毒 Nsp 蛋白酶活性
【基金】：国家科技支撑计划(2015BAD12B02)
【分类号】：S852.651
【正文快照】： PROKARYOTIC EXPRESSION AND PROTEASE ACTIVITY OF PORCINEDELTACORONAVIRUS NSP5ZHANG Huan1,XIAO Wen-jie2,ZENG Zhe1,ZHU Xin-yu1,DONG Nan1,PENG Gui-qing1(1.College of Veterinary Medicine,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China;2.No.1 Middle School

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本文编号：533380