A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65的原核表达及其纯化

发布时间：2017-07-21 03:17

  本文关键词：A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65的原核表达及其纯化

  更多相关文章： A型产气荚膜梭菌α毒素 rCPA-HSP 原核细胞 基因表达 高密度发酵 蛋白纯化

【摘要】：目的原核表达A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65,并进行纯化。方法以CPA全基因为模板,PCR扩增rCPA基因,插入表达质粒p ET-28a(+)-HSP65,构建重组表达质粒p ET-28a-rCPA-HSP65,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物进行12%SDS-PAGE分析;优化表达工艺进行高密度发酵,发酵产物经DEAE阴离子柱上复性后,再经金属螯合层析纯化。结果重组表达质粒p ET-28a-rCPA-HSP65经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约90 000,主要以可溶性形式为主,表达量占菌体总蛋白的30.17%。利用TB培养基,IPTG 34℃诱导5 h的表达产物经纯化后,纯度约达95%,蛋白收率为4.5 mg/g湿菌。结论已成功表达并纯化了A型产气荚膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65,为后期疫苗生物学活性的研究奠定了基础。
【作者单位】： 军事医学科学院军事兽医研究所;吉林农业大学生命科学学院;
【关键词】： A型产气荚膜梭菌α毒素 rCPA-HSP 原核细胞 基因表达 高密度发酵 蛋白纯化
【分类号】：R378;S852.61
【正文快照】： A型产气荚膜梭菌是该类菌中致病性较严重的一种,其产生的α毒素已被证实为最关键且危害最大的致病因子[1]。该菌主要通过感染人类及动物的伤口或胃肠道引起创伤性气性坏疽或严重的食物中毒[2]。目前国内外针对产气荚膜梭菌致病者尚无有效的治疗方法,针对性地预防仍是关键[3]。

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李晓静;夏春丽;李一经;;产气荚膜梭菌α毒素在干酪乳杆菌中的诱导表达及其小鼠口服免疫力[J];微生物学报;2009年08期

2 王俊虹;康琳;高姗;王景林;;产气荚膜梭菌α毒素及其检测[J];中国卫生检验杂志;2009年12期

3 许崇波,朱平,马从林,石瑾琪,冯书章;抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;1999年01期

4 许崇波;许崇利;赵志军;;A型产气荚膜梭菌α毒素基因表达及其免疫保护作用的初步研究[J];微生物学报;2006年04期

5 许崇波;A型产气荚膜梭菌α毒素分子生物学的研究进展[J];宁夏大学学报(自然科学版);2002年02期

6 赵宝华,许崇波,段相林,朱平;表达抗α毒素单链抗体基因工程菌株的构建[J];微生物学杂志;2002年01期

7 赵宝华,许崇波;两种抗α毒素单链抗体基因的序列分析[J];河北师范大学学报;2001年01期

8 许崇波,朱平,姚湘燕,马从林,冯书章;A型产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因的高效表达[J];卫生研究;1998年S1期

9 赵宝华,杨虹,顾为望;产气荚膜梭菌α毒素研究进展[J];河北师范大学学报;2002年05期

10 孙佳芝;王新桐;刘雪慧;苗增民;刘志浩;王海荣;柴同杰;;产气荚膜梭菌α毒素双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用[J];中国兽医学报;2014年06期

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 林明辉;A型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆、表达及免疫学活性研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年

2 孙佳芝;产气荚膜梭菌α毒素双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用[D];山东农业大学;2014年

3 杨文静;C型产气荚膜梭菌α毒素蛋白的表达及其特异性IgY抗体的制备[D];西北农林科技大学;2014年

，

本文编号：571222