口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达

发布时间：2017-08-08 15:10

  本文关键词：口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达

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【摘要】：为确定安徽地区某山羊场发生的疑似口疮(orf)的病原,经过临床诊断、PCR检测以及HeLa细胞培养等途径,确定其为口疮病毒(ORFV),并命名为AH-GY13株。根据GenBank中公布的口疮病毒B2L囊膜蛋白基因序列,设计引物,用PCR方法扩增口疮病毒B2L基因,并将此基因序列及其推导的氨基酸序列与其他不同来源的ORFV分离株进行比较。结果显示,AH-GY13株与选取的10株毒株的核苷酸序列同源性在97.4%~99.3%之间,氨基酸同源性在97.9%~99.7%之间;进化树分析显示,此毒株与辽宁省分离株属于同一分支。将该基因定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a(+)-B2L。转化BL21,经IPTG诱导,B2L基因获得表达,以包涵体的形式存在,通过优化诱导时间和IPTG的浓度,确定了表达B2L基因的最佳诱导条件:IPTG终浓度为1 mmol/L,37℃诱导4 h。Western-blot分析表明,表达产物具有良好的免疫活性。上述结果为进一步研究ORFV B2L囊膜蛋白的结构与功能奠定了基础。
【作者单位】： 安徽农业大学动物科技学院;
【关键词】： 口疮病毒 分离鉴定 BL基因 序列分析 原核表达 蛋白质免疫印迹
【分类号】：S858.27
【正文快照】： 口疮病毒(orf virus,ORFV)是引起山羊、绵羊的接触性嗜上皮性传染病的病原[1]。山羊对ORFV易感,山羊羔和绵羊羔最为敏感,群体发病,在春末夏初高热潮湿季节易发病,多群发于1~3月龄的山羊羔和绵羊羔,病死率可达20%,是危害山羊绵羊养殖业的重要传染病病原,患病山羊和绵羊以及携带

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1 改树青;王志明;刘慧纯;;羊传染性口疮病毒的生物学试验[J];辽宁畜牧兽医;1988年02期

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本文编号：640606