应用多重GeXP-PCR同时检测6种鸡免疫抑制病病毒的研究

发布时间：2017-08-10 23:10

  本文关键词：应用多重GeXP-PCR同时检测6种鸡免疫抑制病病毒的研究

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【摘要】：拟建立一种基于GeXP多基因表达分析系统的多重PCR方法,同时检测6种鸡免疫抑制病病毒——鸡马立克病毒、禽白血病病毒(包括A、B和J亚群)、禽网状内皮组织增生症病毒、禽呼肠孤病毒、鸡传染性贫血病毒和传染性法氏囊炎病毒。多重PCR反应使用嵌合引物和通用引物组合的反应体系,经过GeXP多基因表达分析系统进行毛细管电泳,鉴别PCR产物片段;通过调整嵌合引物浓度、Mg~(2+)浓度、Taq酶浓度优化反应体系及调整退火温度和时间优化反应条件。应用建立的多重GeXP-PCR,分别单独和同时检测6种鸡免疫抑制病病毒的8个目的基因,同时以其他常见禽类病毒和鸡组织器官核酸为对照,验证其特异性;检测8个目的基因不同浓度的克隆质粒,验证其敏感性;应用建立的多重PCR检测300份临床样品,并同时用荧光定量PCR和测序验证其检测结果的准确性。结果表明建立的多重GeXP-PCR方法能够分别扩增出6种病毒,8个特异性目的片段,不能扩增其他常见禽类病毒和鸡组织器官的基因;在低至100copies·20μL~(-1)的水平能同时特异性地检测出6种鸡免疫抑制病病毒核酸;检测300份临床病死鸡样品,190份样品显示为阳性,PCR和测序结果与多重GeXP-PCR结果相符。本研究建立的多重GeXP-PCR方法可特异、敏感、高通量地检测6种鸡免疫抑制性病毒,可用于临床鉴别诊断和分子流行病学调查,具有很高的临床应用价值。
【作者单位】： 广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点试验室;
【关键词】： GeXP多基因表达分析系统 多重PCR 高通量 鸡免疫抑制病病毒
【基金】：国家自然科学基金(31160512) 广西自然科学基金(2014GXNSFCA118006) 广西特聘专家专项基金(2011B020) 广西水产畜牧兽医局科技项目(桂渔牧科201452003;201528013)
【分类号】：S858.31
【正文快照】： 鸡免疫抑制病病毒主要包括鸡马立克病毒(Marek’s disease virus,MDV)[1]、禽白血病病毒(avian leucosis virus,ALV,以A、B和J亚群ALV为主)[2]、禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloen-dotheliosis virus,REV)[3]、禽呼肠孤病毒(avianreovirus,ARV)[4]、鸡传染性贫血病毒(chick

【参考文献】

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本文编号：653112